| 梨NAC结构域蛋白基因克隆与mRNA嫁接传递性研究 |
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| 引用本文： | 宫磊,张文娜,徐海燕,杨玉艳,胡建芳,李天忠.梨NAC结构域蛋白基因克隆与mRNA嫁接传递性研究[J].中国农业科学,2010,43(11):2307-2314. |
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| 作者姓名： | 宫磊 张文娜 徐海燕 杨玉艳 胡建芳 李天忠 |
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| 作者单位： | （中国农业大学农学与生物技术学院果树细胞与分子育种实验室）; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，北京市自然科学基金，中国农业大学基本科研业务费研究生科研创新专项 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆梨NAC结构域蛋白基因NACP,验证其mRNA是否可以通过韧皮部进行嫁接传递。【方法】利用同源克隆的方法,分别克隆‘鸭梨’(Pyrus bretschneideri Yali)和杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge)的NACP基因,利用生物信息学方法进行序列分析。以‘鸭梨’为接穗,杜梨为砧木进行微嫁接。从接穗茎尖、叶片、茎段韧皮部,嫁接口及砧木韧皮部、木质部组织中提取RNA,进行RT-PCR扩增。用特异的限制性内切酶ScrFⅠ对其扩增产物进行酶切鉴定。利用原位杂交技术,检测NACP基因在植物体内的表达部位。【结果】获得‘鸭梨’和杜梨NACP基因全长序列,长度均为1377bp,编码350个氨基酸,包含两个内含子,大小分别为111、96bp,分别命名为YL-NACP和DL-NACP。酶切鉴定结果表明,在接穗‘鸭梨’茎尖、叶片、茎段韧皮部中都有砧木DL-NACP基因的mRNA表达,同时砧木杜梨韧皮部中也有接穗YL-NACP基因的mRNA表达,而木质部中则没有发现该基因表达。通过原位杂交进一步证明,NACP基因只定位于韧皮部。【结论】成功地从‘鸭梨’和杜梨中克隆了全长的NAC结构域蛋白基因NACP,并进一步证明了梨内源性的NACP基因mRNA可以通过韧皮部进行传递,该结果为进一步研究果树砧木与接穗的互作机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 梨 NACP基因 mRNA 嫁接 分子传递 |
| 收稿时间： | 2010-02-03; |
Molecular Cloning of the NAC Domain Protein of Pear and Research on Its mRNA Transport in Phloem |
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| GONG Lei,ZHANG Wen-na,XU Hai-yan,YANG Yu-yan,HU Jian-fang,LI Tian-zhong.Molecular Cloning of the NAC Domain Protein of Pear and Research on Its mRNA Transport in Phloem[J].Scientia Agricultura Sinica,2010,43(11):2307-2314. |
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| Authors: | GONG Lei ZHANG Wen-na XU Hai-yan YANG Yu-yan HU Jian-fang LI Tian-zhong |
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| Institution: | (Laboratory of Fruit Cell and Molecular Breeding, College of Agriculture and Biotechnology, China Agricultural University)
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| Abstract: | |
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| Keywords: | mRNA |
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