| 猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化 |
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| 引用本文： | 连凯琪,周玲玲,王英杰,李翠,宋玉伟,张明亮.猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化[J].江苏农业科学,2019,47(15). |
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| 作者姓名： | 连凯琪 周玲玲 王英杰 李翠 宋玉伟 张明亮 |
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| 作者单位： | 河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000;河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000;河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000;河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000;河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000;河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院,河南安阳,455000 |
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| 基金项目： | 安阳工学院博士科研启动基金 |
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| 摘 要： | 为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间,实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明,成功克隆了pIgG1-Fc的基因666 bp,共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达,表达的融合蛋白分子量约为36 ku。其最佳表达条件如下:在25℃条件下加入终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导6 h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达,为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础,为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。
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| 关 键 词： | Fc 原核表达 包涵体 融合蛋白 |
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