沙地云杉ISSR-PCR反应体系的初步优化 |
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引用本文: | 郑舒文,田有亮,白玉娥,何炎红.沙地云杉ISSR-PCR反应体系的初步优化[J].江苏农业科学,2014(8). |
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作者姓名: | 郑舒文 田有亮 白玉娥 何炎红 |
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作者单位: | 内蒙古农业大学林学院,呼和浩特,010019 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(编号31160166);内蒙古农业大学创新团队项目。 |
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摘 要: | 以沙地云杉叶基因组DNA为材料,采用单因素试验方法对ISSR-PCR体系中的主要成分Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度、退火温度进行筛选,建立并优化沙地ISSR-PCR反应体系。结果表明,UBC835是最适引物,适宜退火温度为50℃。沙地云杉ISSR-PCR分析的最适反应体系(20μL PCR反应体系)为:2.0 mmol/L Mg2+、1.0 U/μL Taq DNA聚合酶、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物、50 ng/μL模板DNA。PCR扩增程序:94℃预变性4 min;94℃变性45 s,50℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。
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关 键 词: | 沙地云杉 叶基因组DNA ISSR-PCR 优化 |
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