| 细胞表面展示有机磷水解酶的恶臭假单胞菌工程菌的构建及全细胞酶活性分析 |
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| 引用本文： | 张红星,李茜茜,叶婷,李维琳,李林.细胞表面展示有机磷水解酶的恶臭假单胞菌工程菌的构建及全细胞酶活性分析[J].华中农业大学学报,2008,27(1):65-70. |
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| 作者姓名： | 张红星 李茜茜 叶婷 李维琳 李林 |
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| 作者单位： | 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070 |
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| 摘 要： | 利用丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)冰核基因的N-末端(inpn)作为锚定单元(anchoring mo-tif),通过与来自黄杆菌属(Flavobacterium sp.)的有机磷水解酶基因(opd 构建融合基因inpn-opd,并连接于假单胞菌表达载体Pymbp,然后导入恶臭假单胞菌(P.putida)野生型菌株AB92019,获得了能在其细胞表面展示有机磷水解酶并具有全细胞酶催化活性的重组工程菌MMBL-opd.SDS-PAGE结果表明,融合基因能表达产生80 ku的蛋白质.重组菌MMBL-opd在无抗性LB固体培养基上能稳定生长,所携带的外源质粒的稳定性达到100%;在添加100 μmol/L Go2 培养基上28℃培养48 h,表面展示的有机磷水解酶具有最高全细胞酶活性,为0.036 U/mg.用蛋白酶K消化处理重组菌表面蛋白可使其全细胞酶活降低92%.重组菌在PBS缓冲液中于4℃条件下保存30 d,仍能保持93%的全细胞酶活.
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| 关 键 词： | 有机磷水解酶 细胞表面展示 冰核蛋白 生物降解 |
| 文章编号： | 1000-2421(2008)01-0065-06 |
| 修稿时间： | 2007年6月4日 |
Construction and Whole-cell Catalytic Activity Analysis of Engineered Pseudomonas putida with Cell-surface Displayed Organophosphorus Hydrolase |
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| ZHANG Hong-xing,LI Qian-qian,YE Ting,LI Wei-lin,LI Lin.Construction and Whole-cell Catalytic Activity Analysis of Engineered Pseudomonas putida with Cell-surface Displayed Organophosphorus Hydrolase[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2008,27(1):65-70. |
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| Authors: | ZHANG Hong-xing LI Qian-qian YE Ting LI Wei-lin LI Lin |
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| Institution: | ZHANG Hong-xing LI Qian-qian YE Ting LI Wei-lin LI Lin(State Key Laboratory of Agricultural Microbiology,Huazhong Agricultural University,Wuhan 430070,China) |
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| Abstract: | In the present study,N-termini sequence(inpn) of ice-nucleating protein gene from Pseudomonas syringae,was employed as the anchoring motif to direct the cell-surface display of a heterologous organophosphorus hydrolase in P.putida wild-type strain AB92019.A chimera gene with inpn and organophosphorus hydrolase encoding gene(opd) from Xanthomonas sp.,was initially constructed and then introduced into AB92019 when mediated by a Pseudomonas expression vector pYMBP.Consequently,the resulting engineered strain B... |
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| Keywords: | organophosphorus hydrolase cell-surface display ice nucleation protein biodegradation |
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