| 草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达 |
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| 引用本文： | 王杭军,叶星,田园园,张莉莉,瞿兰,张蕊.草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株VP5蛋白的原核表达[J].华中农业大学学报,2013,32(2):97-102. |
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| 作者姓名： | 王杭军 叶星 田园园 张莉莉 瞿兰 张蕊 |
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| 作者单位： | 1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广州510380;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306
2. 中国水产科学研究院珠江水产研究所/农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,广州,510380 |
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| 基金项目： | 广东省重点科技项目（2008A020100016）、广东省海洋渔业科技项目（A200899F01，A201101G01）和广州市和荔湾区科技项目（2009J1-C021和20084411115） |
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| 摘 要： | 根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增；通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达；对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系.通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80 ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中.诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体.包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21 (DE3) 工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5％,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(＞95％).比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白.
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| 关 键 词： | 草鱼呼肠孤病毒GCRV-GD108株 M5基因 免疫印迹 原核表达 纯化 |
| 收稿时间： | 2012/6/15 0:00:00 |
Prokaryotic expression of GCRV-GD108 VP5 protein |
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| WANG Hang-jun
,
YE Xing
,
TIAN Yuan-yuan
,
ZHANG Li-li
,
QU Lan
,
ZHANG Rui.Prokaryotic expression of GCRV-GD108 VP5 protein[J].Journal of Huazhong Agricultural University,2013,32(2):97-102. |
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| Authors: | WANG Hang-jun YE Xing TIAN Yuan-yuan ZHANG Li-li QU Lan ZHANG Rui |
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| Institution: | 1,2 1.Pearl River Fishery Research Institute,CAFS/Key Lab of Tropic & Subtropic Fisheries Resource Utilization and Aquaculture,Ministry of Agriculture,Guangzhou 510380,China; 2.College of Fisheries & Life,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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