| 转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建 |
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| 引用本文： | 徐海,鲍熹,王义伟,卢宇,许梦薇,侯继波.转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建[J].江苏农业学报,2015,31(1). |
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| 作者姓名： | 徐海 鲍熹 王义伟 卢宇 许梦薇 侯继波 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014 |
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| 基金项目： | 江苏省农业科技自主创新基金项目 |
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| 摘 要： | 为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒p UC-L-EEB-R。将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体。提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达。结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入。T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录。表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达。
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| 关 键 词： | 同源重组 DNA疫苗 真核表达 T7噬菌体 |
Construction of recombinant bacteriophage T7 delivering eukaryotic expression box |
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| XU Hai,BAO Xi,WANG Yi-wei,LU Yu,XU Meng-wei,HOU Ji-bo.Construction of recombinant bacteriophage T7 delivering eukaryotic expression box[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2015,31(1). |
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| Authors: | XU Hai BAO Xi WANG Yi-wei LU Yu XU Meng-wei HOU Ji-bo |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | homologous recombination DNA vaccine eukaryotic expression T7 phage |
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