| 猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选 |
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| 引用本文： | 王垚,金前跃,周稳,李旭锋,柴永笑,丁培阳,陈晓,邢云瑞,李艳华,郭军庆,张改平.猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选[J].河南农业科学,2019,48(10). |
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| 作者姓名： | 王垚 金前跃 周稳 李旭锋 柴永笑 丁培阳 陈晓 邢云瑞 李艳华 郭军庆 张改平 |
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| 作者单位： | 河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州225009;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;西北农林科技大学,陕西 杨凌712100;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州,450002;河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州450002;河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002;江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州225009;西北农林科技大学,陕西 杨凌712100 |
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| 摘 要： | 为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒(PRV)gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。
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| 关 键 词： | 猪伪狂犬病毒 gE蛋白 毕赤酵母 单克隆抗体 |
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