| T1083替换NtKRP尾部BD融合载体pGBKT7-TS的构建（摘要）（英文） |
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| 引用本文： | 纪耀坤,张伟彬,袁亮.T1083替换NtKRP尾部BD融合载体pGBKT7-TS的构建（摘要）（英文）[J].农业科学与技术,2010,11(3):62-64. |
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| 作者姓名： | 纪耀坤 张伟彬 袁亮 |
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| 作者单位： | 商丘职业技术学院,河南商丘476100 |
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| 摘 要： | 目的]扩增烟草NtKRP基因尾部含T1083替换的片段,将其克隆入pGBKT7载体中。方法]以pBI121KE质粒为模板进行PCR反应,将得到的PCR产物凝胶回收后等摩尔混合,取适量作为模板,得到含定点突变的尾部片段。将该PCR产物克隆入SmaI线性化的pUC19载体,构建含T1083替换的重组子pUC19Ts。通过蓝白斑筛选得到的重组子进行BamHI -SmaI双酶切鉴定,将筛选出的正确重组子送交联合基因测序。将pGBKT7和测序正确的pUC19Ts质粒均用BamHI -SmaI双酶切,分别回收1 320 bp的融合片段和7.3 kb的载体片段进行连接,转化并筛选得到重组子,任意挑取2个单菌培养后提取质粒进行BamHI -SmaI双酶切鉴定。结果]成功构建了NtKRP尾部含T1083替换的BD融合质粒载体pGBKT7-TS。结论]为进一步研究NtKRP尾部T替换对NtKRP与靶物质结合的影响奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | NtKRP pGBKT7-TS 融合载体 |
Construction of BD Fusion Vector pGBKT7-Ts with T1083 Substitution in NtKRP Tail |
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| JI Yao-kun,ZHANG Wei-bin,YUAN Liang.Construction of BD Fusion Vector pGBKT7-Ts with T1083 Substitution in NtKRP Tail[J].Agricultural Science ＆ Technology,2010,11(3):62-64. |
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| Authors: | JI Yao-kun ZHANG Wei-bin YUAN Liang |
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| Institution: | Shang Qiu Polytechnic,Shangqiu 476100 |
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| Abstract: | T1083 substitution mutant in tail sequence of tobacco NtKRP was amplified by overlapping PCR from pBI121KE plasmid template.The fragment was then cloned into pGBKT7 vector to construct BD fusion expression plasmid pGBKT7-Ts,which laid an experimental foundation for further understanding of the effect of T1083 substitution mutation on the interaction of NtKRP and its target partner. |
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| Keywords: | NtKRP pGBKT7-TS NtKRP pGBKT7-Ts Fusion plasmid |
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