| 基于复合EST-SSR 标记的大白菜种子纯度
鉴定及SNP 位点获取 |
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| 引用本文： | 赵,新,王,永,兰青阔,贺长征,陈,锐,李欧静,刘,娜朱,珠,郭永泽.基于复合EST-SSR 标记的大白菜种子纯度
鉴定及SNP 位点获取[J].中国蔬菜,2013,1(14):31. |
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| 作者姓名： | 赵 新 王 永 兰青阔 贺长征 陈 锐 李欧静 刘 娜朱 珠 郭永泽 |
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| 作者单位： | （;1.天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津 300381；;2.天津市种子管理站，天津 300061） |
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| 基金项目： | 天津市科技支撑计划项目（10ZCGYNC00400），天津市应用基础及前沿技术研究计划项目（10JCYBJC09300） |
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| 摘 要： | 以10 份大白菜杂交种及其亲本为研究对象，基于NCBI 基因组数据库中EST 序列信息，应
用SSR 标记及高分辨 率溶解曲线技术筛选出用于大白菜杂交种纯度鉴 定的SNP 位点及复合 SSR 位 点，并
根据 高通量分子检测技术 种子纯度鉴定的需要 ，对单粒种子育苗条件、单株植株提取 状态、快速DNA
提取方法、复合PCR 体系的建立等关键 技术进行了摸索及优化。结果显示：经过48 h 破壳状态的单粒
种子，采用改良CTAB 法可于3 h 内得到较高质量的DNA；同时经7 d 达到苗期状态的单株叶片，采用
chexe-100 法亦可于40 min 内完成DNA 提取；筛选得到的SNP 位点可对6 份大白菜杂交种进行纯度鉴定，
复合SSR 位点可对10 份大白菜杂交种进行纯度鉴定。
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| 关 键 词： | 大白菜 种子 纯度鉴定 复合EST-SSR SNP |
| 收稿时间： | 2013-03-25; |
Purity Identification and SNP Site Obtain of Chinese Cabbage Hybrids Using
Multiplex EST-SSR Marker |
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| Institution: | （;1.Institute of Tianjin Agriculture Quality Standard and Testing Technology， Tianjin 300381， China； ;2.Tianjin Seed;
Station， Tianjin 300061， China） |
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| Abstract: | In this research，10 Chinese cabbage〔Brassica campestris L. ssp. pekinensis（Lour）
Olsson〕hybrids and their parents were taken as study objects．Based on the EST sequences from
NCBI genome data base，a SNP site and multiplex EST- SSR sites，which could be used to identify the
purity of Chinese cabbage hybrids，were screened by SSR marker and high resolution melting（HRM）
technology．According to the requirement of seed purity identification by high throughput molecular
technology，the key techniques such as seedling culture condition of single seed，extraction status of
single grain plant, rapid DNA extraction method and establishment of multiplex PCR system were groped
and optimized．Results showed that the single germinating seed after 48 h could gain DNA with higher
quality by the improved CTAB method in 3 h. Meanwhile，plant leaves reached seeding stage after 7
d，could complete DNA extraction by chexe-100 method within 40 min．The SNP site obtained by screening could be used to indentify the purity of 6 Chinese cabbage hybrids，and the multiplex ESTSSR
locus could be used to indentify the purity of 10 Chinese c abbage hybrids． |
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| Keywords: | Seed Purity identification Multiplex EST- SSR S NP |
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