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| 溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaB基因的克隆及原核表达 | |
| 引用本文： | 梁海鹰,夏立群,吴灶和,简纪常,鲁义善.溶藻弧菌HY9901鞭毛蛋白flaB基因的克隆及原核表达[J].水产学报,2010,34(1):139-146. |
| 作者姓名： | 梁海鹰 夏立群 吴灶和 简纪常 鲁义善 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院南海海洋研究所,广东,广州,510301;广东海洋大学水产学院,广东,湛江,524025;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东,湛江,524088;广东省水产经济动物病害控制重点实验室,广东,湛江,524088; 2. 广东海洋大学水产学院,广东,湛江,524025 3. 中国科学院南海海洋研究所,广东,广州,510301;广东海洋大学水产学院,广东,湛江,524025;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东,湛江,524088;广东省水产经济动物病害控制重点实验室,广东,湛江,524088 4. 广东海洋大学水产学院,广东,湛江,524025;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室,广东,湛江,524088;广东省水产经济动物病害控制重点实验室,广东,湛江,524088 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划(2007BAD29B03); 广东省科技重大专项(2004A20401001); 广东省自然科学基金项目(9151064201000063); 广东海洋大学自然科学研究项目(0612187) |
| 摘 要： | 参照GenBank上登录的弧菌鞭毛蛋白flaB基因序列设计引物,PCR扩增溶藻弧菌HY9901株的flaB全长基因,序列分析结果显示该基因为1134bp,编码377个氨基酸。与GenBank中其它弧菌的同源基因序列比对显示,溶藻弧菌flaB基因与副溶血弧菌flaB基因的同源性最高(92%)。将该基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出带His-tag的融合蛋白,分子量大小与预期一致。优化的表达条件为28℃,0.4mmol/LIPTG浓度诱导10h。用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,制备了多克隆抗体。Western-blotting结果表明鼠抗FlaB血清不仅能与诱导后的重组蛋白发生反应,而且能与天然的溶藻弧菌全菌蛋白发生反应,提示鞭毛蛋白FlaB可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一,为下一步进行FlaB蛋白免疫原性的研究以及疫苗的制备奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 溶藻弧菌 鞭毛蛋白 flaB基因 原核表达 |
| 收稿时间： | 3/5/2009 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2009/7/25 0:00:00 |
Cloning and prokaryotic expression of flaB gene from Vibrio alginolyticus strain HY9901, the causative agent of vibriosis in Lutjanus sanguineus |
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| XIA Liqun,WU Zaohe,JIAN Jichang and LU Yishan.Cloning and prokaryotic expression of flaB gene from Vibrio alginolyticus strain HY9901, the causative agent of vibriosis in Lutjanus sanguineus[J].Journal of Fisheries of China,2010,34(1):139-146. | |
| Authors: | XIA Liqun WU Zaohe JIAN Jichang and LU Yishan |
| Institution: | LIANG Hai-ying1,2,3,4,5,XIA Li-qun2,WU Zao-he1,JIAN Ji-chang2,LU Yi-shan2,4 (1.South China Sea Institute of Oceanology,Chinese Academy of Science,Guangzhou 510301,China,2. Fisheries College,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524025,3.Guangdong Key Laboratory of Pathogenic Biology , Epidemiology for Aquatic Economic Animals,4. Guangdong Key Laboratory of Control for Diseases of Aquatic Economic Animals,5.Graduate School of Chinese Academ... |
| Abstract: | To investigate the possibility of flaB as a candidate antigen for vaccine production,primers were designed based on flaB gene sequences published in GenBank. The flaB gene of Vibrio alginolyticus strain HY9901,the causative agent of vibriosis in Lutjanus sanguineus,was amplified by PCR and cloned into pMD19-T vector. Sequence analysis revealed that flaB gene is 1 134 bp and encodes a putative protein of 377 amino acids. The amino acid sequence of FlaB of V. algonilyticus showed highest identity to V.parahae... |
| Keywords: | Vibrio alginolyticus flagellin flaB gene prokaryotic expression |
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