| RNA干扰技术抑制新家坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达 |
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| 引用本文： | 夏立群,梁海鹰,张红莲,秦启伟.RNA干扰技术抑制新家坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达[J].水产学报,2010,34(4):611-617. |
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| 作者姓名： | 夏立群 梁海鹰 张红莲 秦启伟 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学水产学院,广东海洋大学水产学院,广东海洋大学水产学院,中国科学院南海海洋研究所 |
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| 基金项目： | 国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA09Z411，2006AA100306)；国家自然科学基金项目(30930070)；广东省自然科学基金项目(06104920) |
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| 摘 要： | 新加坡石斑鱼虹彩病毒（singapore grouper iridovirus，SGIV）是一种严重的能引起全身性疾病的病原体，对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP46（infected cell polypeptides 46）基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞（fathead minnow cells，FHM）中进行融合表达，用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIV-ICP46的序列，设计并体外化学合成了特异性干扰SGIV-ICP46的siRNA（siRNA-ICP46），与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中，通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24~48 h，实验细胞（共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46）和阳性对照细胞（共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46）中的荧光微弱，发荧光的细胞数量较阴性对照（共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46）少70%左右，但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强，在转染后72 h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24~48 h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV-ICP46基因的表达。
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| 关 键 词： | RNA干扰 绿色荧光蛋白 石斑鱼虹彩病毒 感染细胞多肽ICP46 |
| 收稿时间： | 2009/11/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2009/12/24 0:00:00 |
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