| 溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立 |
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| 引用本文： | 李明云,丁文超,陈炯,史雨红.溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立[J].水产学报,2010,34(10):1559-1565. |
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| 作者姓名： | 李明云 丁文超 陈炯 史雨红 |
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| 作者单位： | 宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室,浙江,宁波,315211 |
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| 基金项目： | 长江学者和创新团队发展计划(IRT0734);国家科技支撑计划(2007BAD43B08);浙江省重大国际合作项目(2006C14017);宁波市重大委托项目(2008C10022) |
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| 摘 要： | 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致。将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21 pLys E,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的抗血清建立了间接ELISA检测方法,检测灵敏度为104 CFU/mL,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应。
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| 关 键 词： | 溶藻弧菌 OmpK基因 原核表达 间接酶联免疫吸附法 |
| 收稿时间： | 2010/6/25 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2010/7/29 0:00:00 |
Expression of OmpK gene of Vibrio alginolyticus and development of a detection method of indirect ELISA |
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| LI Ming-yun,DING Wen-chao,CHEN Jiong and SHI Yu-hong.Expression of OmpK gene of Vibrio alginolyticus and development of a detection method of indirect ELISA[J].Journal of Fisheries of China,2010,34(10):1559-1565. |
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| Authors: | LI Ming-yun DING Wen-chao CHEN Jiong and SHI Yu-hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio alginolyticus OmpK gene prokargotic expression indirect ELISA |
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