| 褐牙鲆中miRNAs与甲状腺激素受体TRβ的相互作用研究 |
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| 引用本文： | 刘素萍,付元帅,喻杰,张俊玲,施志仪.褐牙鲆中miRNAs与甲状腺激素受体TRβ的相互作用研究[J].水产科学,2020,39(3):299-305. |
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| 作者姓名： | 刘素萍 付元帅 喻杰 张俊玲 施志仪 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306;上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306;上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306;上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306;上海海洋大学,农业农村部淡水水产种质资源重点实验室,上海水产养殖工程技术研究中心,水产科学国家级实验教学示范中心,上海201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(41676138). |
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| 摘 要： | 甲状腺激素通过与其受体结合对褐牙鲆变态起重要的调控作用,而miRNAs通过结合靶基因3′-UTR在转录后水平调节靶基因的表达。为探讨miRNAs在褐牙鲆变态中的作用,通过生物信息学方法预测褐牙鲆TRβ基因3′-UTR存在的miRNAs结合位点,并利用3′-RACE方法克隆TRβ基因的3′-UTR序列,通过体外DNA重组技术构建应用于miRNAs靶向基因检测的双荧光素酶重组报告载体,利用细胞转染和双荧光素酶报告技术分析多个miRNAs与TRβ基因的作用关系。研究结果显示,克隆得到了一段长为437 bp的褐牙鲆TRβ基因的3′-UTR序列,发现3′-UTR序列上存在pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p、pol-miR-138和pol-miR-125a*的结合位点,成功构建了双荧光素酶重组报告载体,命名为pmirGLO-TRβ-3′-UTR。双荧光素酶报告分析结果表明,pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p和pol-miR-138均为作用于褐牙鲆TRβ的靶向miRNAs,而pol-miR-125a*对TRβ基因无直接的调节作用。研究结果将为后续深入研究miRNAs与TRβ在褐牙鲆变态发育中的功能及其作用机制提供基础。
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| 关 键 词： | 褐牙鲆 miRNA TRβ pmirGLO-TRβ-3′-UTR 双荧光素酶报告基因技术 |
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