| 星突江鲽胰岛素样生长因子II的原核表达与生物活性分析 |
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| 引用本文： | 臧坤,徐永江,柳学周,史宝,王妍妍.星突江鲽胰岛素样生长因子II的原核表达与生物活性分析[J].中国水产科学,2015,22(2):214-223. |
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| 作者姓名： | 臧坤 徐永江 柳学周 史宝 王妍妍 |
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| 作者单位： | 1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院 黄海水产研究所, 山东 青岛 266071; 2. 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海201306 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目(2012AA10A413); 鲆鲽类现代产业技术体系(CARS-50); 中央级公益性事业单位基本科研业务费项目(20603022012022); 山东省自然科学基金项目(ZR2012CQ025). |
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| 摘 要： | 根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-II基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus)IGF-II成熟肽的全长c DNA序列(210 bp),同源性分析显示IGF-II成熟肽在B、A和D区高度保守。利用原核表达载体p ET-28a构建了重组表达质粒(IGF-II/p ET28a),转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,获得了N端含6个组氨酸的重组蛋白。37℃条件下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的42.7%。重组蛋白主要以包涵体形式存在,经SDS-PAGE电泳检测,IGF-II重组蛋白大小为11.4 k D,Western-Blotting免疫印迹呈阳性。包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,获得了纯化IGF-II蛋白。细胞增殖实验结果显示,重组蛋白可显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖,表明获得的IGF-II重组蛋白具有细胞水平的生物活性。研究结果为深入研究星突江鲽IGF-II的功能提供了基础资料。
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| 关 键 词： | 短蛸 繁殖行为 胚胎发育星突江鲽 IGF-II 原核表达 生物活性 |
| 修稿时间： | 2015/6/29 0:00:00 |
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