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利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎
引用本文:丁浩,田永胜,武鹏飞,刘洋,陈松林.利用显微注射技术冷冻保存牙鲆胚胎[J].中国水产科学,2008,15(5).
作者姓名:丁浩  田永胜  武鹏飞  刘洋  陈松林
作者单位:1. 中国水产科学研究院,黄海水产研究所,农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室,山东,青岛,266071;上海海洋大学,上海,200090
2. 中国水产科学研究院,黄海水产研究所,农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室,山东,青岛,266071
3. 中国水产科学研究院,黄海水产研究所,农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室,山东,青岛,266071;中国海洋大学,山东,青岛,266003
基金项目:国家自然科学基金,国家自然科学基金,国家自然科学基金
摘    要:在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用.本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存.研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG:MeOH=2:1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选.实验结果显示,注射600pL(1 pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P<0.05),成活率为(64.04 2.05)%;对卵黄囊、卵膜与卵黄膜间隙作为注射部位进行了选择,发现采用卵黄囊内注射的胚胎成活率高于"五步平衡法",并显著高于通过卵黄膜间隙注射(P<0.05),其成活率为(44.24±7.88)%.结果表明,注射600pL 35%PM21至牙鲆心跳期胚胎卵黄囊内,平衡10min,然后进行玻璃化冷冻保存,取得了68.2y.4%透明胚胎,能够对牙鲆胚胎提供很好的保护.说明显微注射方法可以成功地将抗冻剂注射入牙鲆胚胎,并在牙鲆胚胎的冷冻及胚胎的完整性方面发挥有效的保护作用.

关 键 词:牙鲆  胚胎  显微注射  玻璃化  冷冻保存
修稿时间:2010/4/8 0:00:00

Cryopreservation of flounder(Paralichthys olivaceus)embryos using microiniection
DING Hao,TIAN Yong-sheng,WU Peng-fei,LIU Yang,CHEN Song-lin.Cryopreservation of flounder(Paralichthys olivaceus)embryos using microiniection[J].Journal of Fishery Sciences of China,2008,15(5).
Authors:DING Hao  TIAN Yong-sheng  WU Peng-fei  LIU Yang  CHEN Song-lin
Abstract:
Keywords:
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