| 类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 黄海峰,张振兴,杨小健,曹瑞勇,李宝宝,聂鑫,朱姝,李国华,彭冬梅,李亚颖,王凤阳,杜丽.类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因的克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析[J].中国畜牧兽医,2018(2). |
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| 作者姓名： | 黄海峰 张振兴 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 聂鑫 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 |
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| 作者单位： | 海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室; |
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| 摘 要： | 试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因进行克隆与原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因序列,设计1对引物。通过PCR扩增得到大小为1 641bp的groEL基因片段,将其连接至pMD19-T载体,构建pMD19-T-groEL重组质粒,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定正确后,构建重组质粒pET-28a(+)-groEL。将鉴定正确的pET-28a(+)-groEL质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,运用SDS-PAGE和Western blotting方法进行蛋白质鉴定,利用DNAMAN和BioEdit等软件进行生物信息学分析。结果发现,试验成功克隆了类鼻疽伯克霍尔德菌groEL基因并进行了蛋白表达,表达的融合蛋白大小约为64 ku,GroEL蛋白的分子式为C4510H7381N1641O1840S521,原子总个数为15 893,消光系数为32 500,不稳定指数为40.31,亲水性平均值为0.901。GroEL蛋白二级结构中α-螺旋(Hh)、延伸链(Ee)、无规则卷曲(Cc)分别占48.71%、13.19%和38.10%。本试验结果为深入探究类鼻疽杆菌groEL基因的分子作用机理奠定了基础。
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