| 定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 夏文龙,吴植,郭长明,朱善元,余树培,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌.定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用[J].中国畜牧兽医,2018(4). |
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| 作者姓名： | 夏文龙 吴植 郭长明 朱善元 余树培 张鑫宇 夏晓莉 孙怀昌 |
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| 作者单位： | 扬州大学兽医学院江苏省重要动物疫病与人兽共患病协同创新中心;江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室 |
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| 摘 要： | 为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54ng/mL,持续时间为15d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。
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