| 羊源多杀性巴氏杆菌sodA基因的克隆、表达及其生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 安琪,黄海峰,张振兴,李宝宝,张萌萌,郑义盈,王成强,章泸尹,杨小健,曹瑞勇,聂鑫,杜丽,王凤阳.羊源多杀性巴氏杆菌sodA基因的克隆、表达及其生物信息学分析[J].中国畜牧兽医,2018(8). |
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| 作者姓名： | 安琪 黄海峰 张振兴 李宝宝 张萌萌 郑义盈 王成强 章泸尹 杨小健 曹瑞勇 聂鑫 杜丽 王凤阳 |
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| 作者单位： | 海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 |
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| 摘 要： | 为了解羊源多杀性巴氏杆菌超氧化物歧化酶(SOD)的生物学功能,本试验对该菌sodA基因进行克隆及原核表达,并对克隆的sodA基因进行遗传进化树分析,对其表达的SOD蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中多杀性巴氏杆菌HN06株基因组中sodA基因序列信息设计引物进行PCR扩增,将产物与pET-28a(+)载体相连,构建pET-28a(+)-sodA重组质粒,将该质粒转化E.coli DH5α感受态细胞进行克隆,再转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞进行表达,经IPTG诱导后对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。结果显示,本试验成功扩增出大小为645bp的目的片段,并表达出大小约28ku的目的蛋白。遗传进化树分析表明,该基因与HN07(GenBank登录号:CP007040.1)和Pm70(GenBank登录号:AE004439.1)株亲缘关系较近,重组蛋白生物信息学分析显示,该融合蛋白为稳定的酸性亲水可溶性蛋白,分子式为C1085H1651N293O309S9,分子质量为24 032.36u,理论等电点为6.19,消光系数为45 170,不稳定系数为26.87(40),在哺乳动物网织红细胞的半衰期预计为30h,疏水指数为82.15,总平均疏水性(GRAVY)为-0.282,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。以上研究结果为后续深入研究多杀性巴氏杆菌在羊体内的存活机制及研发预防巴氏杆菌病的疫苗提供了参考。
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