| 羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 张萌萌,李宝宝,曹瑞勇,黄海峰,张振兴,杨小健,聂鑫,朱姝,王凤阳,杜丽.羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSL1467基因克隆、表达及其蛋白生物信息学分析[J].中国畜牧兽医,2018(9). |
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| 作者姓名： | 张萌萌 李宝宝 曹瑞勇 黄海峰 张振兴 杨小健 聂鑫 朱姝 王凤阳 杜丽 |
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| 作者单位： | 海南大学热带农林学院动物科技学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室 |
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| 摘 要： | 试验旨在克隆和表达羊源性类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSL1467基因,并对其表达的蛋白进行生物信息学分析。以羊源类鼻疽伯克霍尔德菌(BPHN1株)基因组为模板,参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSL1467基因序列设计引物,PCR扩增获得目的基因片段,将所得片段与pET-28a(+)载体连接,构建pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒。将鉴定正确的pET-28a(+)-BPSL1467重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达产物。使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale相关生物信息学软件对BPSL1467基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,本试验成功克隆了462bp的BPSL1467基因,诱导表达重组蛋白大小约为22ku,主要以包涵体的形式存在。BPSL1467蛋白分子式为C763H1209N203O217S6,分子质量为16 890.58u;其不稳定系数为33.95,属于稳定蛋白;理论等电点(pI)为8.85,为碱性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)为-0.190,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主。本试验结果为深入研究羊源类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSL1467基因的分子作用机理提供了参考依据。
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