| 牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达 |
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| 引用本文： | 许金俊,秦爱建,金文杰,刘岳龙.牛γ-干扰素在昆虫细胞中的高效表达[J].中国兽医学报,2006,26(6):626-630. |
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| 作者姓名： | 许金俊 秦爱建 金文杰 刘岳龙 |
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| 作者单位： | 扬州大学,兽医学院,江苏,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 江苏省333新世纪科学技术带头人培养工程;扬州市-扬州大学科技合作基金 |
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| 摘 要： | 应用RT-PCR技术从经植物血凝素(PHA)刺激诱导的奶牛脾脏淋巴细胞总RNA中扩增出牛-γ干扰素基因(bovine interferon-γ,BovIFN-γ)cDNA,并克隆到pGEM-T easy载体中,经过限制性酶切分析和测序证实,所克隆到的基因编码区序列与已报道的序列完全一致.将含信号肽的BoIFN-γ基因整个编码区cDNA亚克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Ⅰ中,构建了转移载体pFastBac 1-BoIFN-γ,转座到宿主菌DH10 Bac中,在含庆大霉素、四环素、卡那霉素、IPTG和X-gal的KGTIX LB平板上筛选白色菌落,提取DNA获得重组穿梭载体Bacmid-BoIFN-γ质粒,与脂质体共转染Sf9细胞,产生有感染力的重组杆状病毒reBac-BoIFN-γ.重组病毒经过传代扩增感染Sf9细胞,通过IFA试验、Western-blot和抗病毒活性测定证实,BoIFN-γ基因在感染的昆虫细胞和上清中得到了表达,上清中活性可达2.651×105U/mL.表达条件优化结果表明,不同MOI对rBoIFN-γ的表达产量影响不大,上清中干扰素活性在感染后5 d达到高峰.
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| 关 键 词： | 牛 γ-干扰素基因 杆状病毒 表达 |
| 文章编号： | 1005-4545(2006)06-0626-05 |
| 收稿时间： | 2005-06-20 |
| 修稿时间： | 2005年6月20日 |
Expression of Biologically Active Recombinant Bovine Interferon-γ in Sf9 Cells |
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| XU Jin-jun,QIN Ai-jian,JIN Wen-jie,LIU Yue-long.Expression of Biologically Active Recombinant Bovine Interferon-γ in Sf9 Cells[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2006,26(6):626-630. |
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| Authors: | XU Jin-jun QIN Ai-jian JIN Wen-jie LIU Yue-long |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine interferon-gamma gene baeulovirus express |
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