|
|||||
|
|
| 成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备 | |
| 引用本文： | 喻华英,高丰,王景林.成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备[J].中国兽医学报,2005,25(6):604-607. |
| 作者姓名： | 喻华英 高丰 王景林 |
| 作者单位： | 1. 新疆塔里木大学,动物科技学院,新疆,阿拉尔,843300 2. 吉林大学畜牧兽医学院,吉林,长春,130062 3. 军事医学科学院微生物流行病研究所,北京,100071 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30270999） |
| 摘 要： | 根据GenBank中Ⅰ型痢疾志贺菌ShT-A基因的核苷酸序列，设计合成了2对引物，分别进行PCR扩增，将PCR产物分别与pGEM-T连接构建了克隆质粒pGEM-TA1和pGEM—TA2。用BamHⅠ和KpnⅠ以及BamHⅠ和XhoⅠ双晦切pGEM-TA1和pGEM—TA2．均得到大小为895bp的ShT-A基因片段，分别与pQE30和pET21a（＋）原核重组表达载体连接．构建pQE30-A2和pET-21A，原核重组表达质粒。工程菌M15／pQE30-A2和BL-21／pET-21A1经lPTG诱导．SDS-PAGE电泳观察，均没有目的蛋白表达。这表明全长ShT-A可能对E．coli细胞产生毒性作用。DNAsis软件分析ShT-A基因序列，发现在513bp处有HindⅡ位点．以ShT-A上游引物的BamHⅠ和HindⅡ从pGEM-TA。切出1个513bp的截短片段．重新插入表达载体pQE30．经PCR和双酶切鉴定正确后，得到pQE30-A513重组表达质粒．转化E．coli M15经IPTG诱导．SDS-PAGE电泳观察，在20000处出现1条特异性的表达蛋白带．与截短ShT-A513相对分子质量相符。经薄层扫描分析，试截短片段的表达量约占菌体总蛋白的37．4％，主要为包涵体形式。免疫印迹结果表明．表达的重组ShT—A513，蛋白同抗ShT-A513鼠多抗有特异性结合。 |
| 关 键 词： | 志贺毒素A亚单位 表达 抗体制备 |
| 文章编号： | 1005-4545(2005)06-0604-04 |
| 收稿时间： | 2004-06-14 |
| 修稿时间： | 2004年6月14日 |
Expression and Antibody Preparation with Matured and Truncated of Shiga Toxin A in E. coli |
|
| YU Hua-ying,GAO Feng,WANG Jing-lin.Expression and Antibody Preparation with Matured and Truncated of Shiga Toxin A in E. coli[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2005,25(6):604-607. | |
| Authors: | YU Hua-ying GAO Feng WANG Jing-lin |
| Institution: | 1. College of Animal and Technology,Taremu Agricultural University, Alar , Xingjiang 843300, China ; 2. College of Animal Science and Veterinary Medicine ,Jilin University ,Changchun 130062 ,China ; 3. Institute of Microbiology and Epidemiology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Shiga toxin A expression antibody preparation |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ | |