| 猪圆环病毒2型ORF1、ORF2和ORF3原核表达和多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 陈禹,杜谦,霍瑞超,王莉莉,童德文,黄勇.猪圆环病毒2型ORF1、ORF2和ORF3原核表达和多克隆抗体的制备[J].中国兽医学报,2015,35(5):686-691. |
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| 作者姓名： | 陈禹 杜谦 霍瑞超 王莉莉 童德文 黄勇 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学学院,陕西杨凌,712100 |
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| 摘 要： | 猪圆环病毒2型(porcine Circovirus type 2,PCV2)感染给养猪业造成巨大的经济损失,而PCV2ORF1、ORF2和ORF3与PCV2的复制、免疫原性及致病机理密切相关。本研究制备PCV2ORF1、ORF2和ORF3多克隆抗体,为进一步研究PCV2ORF1、ORF2和ORF3的功能提供材料。依据PCV2全基因组序列,分别设计针对PCV2ORF1、ORF2和ORF3编码基因的特异性引物,PCR扩增后,克隆入原核表达载体pET-32a的BamHⅠ/NcoⅠ和HindⅢ位点之间,经PCR、双酶切和测序鉴定正确的重组原核表达载体分别命名为pET-ORF1、pET-ORF2和pET-ORF3。重组质粒分别转化E.coli BL21菌株,1 mmol/L IPTG诱导表达ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白,SDS-PAGE测定结果表明其相对分子质量分别约为52 000、39 000和29 000。大量诱导重组蛋白表达后,回收目的蛋白条带、匀浆后免疫新西兰大白兔,制备兔抗PCV2ORF1、ORF2和ORF3重组蛋白血清。兔抗血清纯化后,Western blot检测抗血清与重组蛋白的特异性结合情况及其效价,证明所制备多克隆抗体均具有较强的特异性,效价均高于1∶10 000。
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| 关 键 词： | PCV2 ORF1 ORF2 ORF3 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibodies preparation of ORF1, ORF2 and ORF3 of porcine circovirus type 2 |
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| CHEN Yu,DU Qian,HUO Rui-chao,WANG Li-li,TONG De-wen,HUANG Yong.Prokaryotic expression and polyclonal antibodies preparation of ORF1, ORF2 and ORF3 of porcine circovirus type 2[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2015,35(5):686-691. |
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| Authors: | CHEN Yu DU Qian HUO Rui-chao WANG Li-li TONG De-wen HUANG Yong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine circovirus type 2 ORF1 ORF2 ORF3 polyclonal antibody |
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