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| 小反刍兽疫病毒M蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | |
| 作者单位： | ;1.军事医学科学院军事兽医研究所;2.吉林农业大学动物科技学院;3.吉林大学动物医学学院;4.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病协同创新中心 |
| 摘 要： | 为制备鼠抗小反刍兽疫M蛋白多克隆抗体,提取小反刍兽疫病毒(PPRV,Nigeria 75/1疫苗株)总RNA,用RTPCR方法扩增M基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒进行酶切,回收目的片段后克隆于原核表达载体PGEX-4T-1,获得重组质粒PGEX-4T-1-M,转化大肠杆菌Transetta(DE3)并进行诱导表达,优化诱导蛋白表达条件,放大培养收获目的蛋白,并进行纯化,用纯化后的目的蛋白制备免疫原免疫昆明鼠制备多克隆抗体,利用间接免疫荧光方法检测抗体的结合能力。结果成功扩增出大小约为1 005bp(去掉终止密码子)的PPRV M基因;并构建了真核表达载体PGEX-4T-1-M,经IPTG诱导后目的蛋白以包涵体的形式表达,蛋白表达的最优条件为37℃,0.4mmol/L IPTG诱导4h;用经Ni-NTA纯化后的重组蛋白3次免疫昆明鼠后成功获得了PPRV M蛋白鼠源多克隆抗体,间接免疫荧光试验显示该多克隆抗体能够特异性识别非变性全长M蛋白。 |
| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 原核表达 M蛋白 Western blot 多克隆抗体 |
Prokaryotic expression of the M gene from peste des petits ruminants virus and the preparation of polyclonal antibody |
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| Abstract: | |
| Keywords: | |
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