| 靶向非洲猪瘟病毒EP152R基因sgRNA细胞系的构建及其对ASFV复制影响的研究 |
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| 引用本文： | 皇甫皓月,雷薪霖,席飞,黄炼榆,王可欣,沈冬冬,张纪文,张振江,李芳,步志高,殷昊,赵东明.靶向非洲猪瘟病毒EP152R基因sgRNA细胞系的构建及其对ASFV复制影响的研究[J].中国预防兽医学报,2023(5):452-458. |
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| 作者姓名： | 皇甫皓月 雷薪霖 席飞 黄炼榆 王可欣 沈冬冬 张纪文 张振江 李芳 步志高 殷昊 赵东明 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室;2. 武汉大学医学研究院 |
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| 基金项目： | 兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP202101)； |
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| 摘 要： | 有报道证实，缺失重要功能基因EP152R的非洲猪瘟病毒(ASFV)不能有效复制。为了筛选靶向ASFV EP152R基因的小向导RNA (sgRNA)，分析EP152R基因对ASFV复制的影响，本研究利用簇状规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9 (CRISPR-Cas9)核酸酶系统(CCTop)并利用猪的基因组作为脱靶对象设计并筛选靶向ASFV EP152R基因(72387nt～72845nt)的sg RNA，并采用非随机整合报告系统(TIDE)计算各对sg RNA的编辑效率确定最佳sg RNA。结果显示，筛选了5对靶向敲除ASFV EP152R基因的sg RNA，其中3对sg RNA对EP152R基因的编辑效率达30%～42%，另外两对sg RNA的编辑效率低于10%。将筛选的3对sg RNA退火后分别克隆至p-LentiCRISPRv2载体中，构建3个重组慢病毒质粒p-LentiCRISPRv2-gREP152R-1/2/3，并采用菌液PCR及测序鉴定正确后分别与2个辅助质粒共转染HEK293T细胞，72 h后获得各慢病毒并分别感染野猪肺细胞(WSL细胞)，通过嘌呤霉素筛选表达各s...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 簇状规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9 EP152R g RNA |
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