| 猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究 |
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| 引用本文： | 张焕容,曹三杰,文心田,肖驰.猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究[J].中国预防兽医学报,2007,29(10):796-801. |
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| 作者姓名： | 张焕容 曹三杰 文心田 肖驰 |
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| 作者单位： | 1. 西南民族大学,生命科学与技术学院,四川,成都,610041;四川农业大学,基因芯片实验室/四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川,雅安,625014
2. 四川农业大学,基因芯片实验室/四川省动物疫病与人类健康重点实验室,四川,雅安,625014 |
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| 摘 要： | 对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。
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| 关 键 词： | 猪伪狂犬病 猪细小病毒病 猪流行性乙型脑炎 基因芯片 制备 检测方法 |
| 文章编号： | 1008-0589（2007）10-0796-06 |
| 修稿时间： | 2006-08-31 |
DNA microarray for detection of PRV, PPV and JEV |
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| ZHANG Huan-rong,CAO San-jie,WEN Xin-tian,XIAO Chi.DNA microarray for detection of PRV, PPV and JEV[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2007,29(10):796-801. |
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| Authors: | ZHANG Huan-rong CAO San-jie WEN Xin-tian XIAO Chi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pseudorabies porcine parvovirus japanese encephalitis microarray fabrication detection method |
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