| 表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽孢杆菌的制备及其免疫效果评价 |
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| 引用本文： | 陈志,丁可欣,林霞琳,黄潇航,黄志坚,殷光文.表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽孢杆菌的制备及其免疫效果评价[J].中国预防兽医学报,2019(4):408-413. |
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| 作者姓名： | 陈志 丁可欣 林霞琳 黄潇航 黄志坚 殷光文 |
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| 作者单位： | 福建农林大学动物科学学院/福建省动物药物工程实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然基金-青年项目(31502058);国家自然科学基金面上项目(31872466);福建省高校杰出青年人才培育项目(KLa16029A);福建省高校新世纪优秀人才项目(KLa17059A) |
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| 摘 要： | 枯草芽孢杆菌可以作为外源蛋白的表达系统,其作为重组蛋白的递呈载体具有很大优势,而纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高目标蛋白抗原性的佐剂。为增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,本研究从已构建的重组质粒中扩增EDA-EmIMP1和EmIMP1基因片段,并构建重组表达质粒pHT01-EDA-EmIMP1和pHT01-EmIMP1,将获得的重组质粒转化枯草芽孢杆菌感受态细胞,制备的重组枯草芽孢杆菌鉴定正确后增殖培养。将实验鸡分为5组,分别是:EDA组(免疫pHT01-EDA-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、EmIMP1组(免疫pHT01-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌)、枯草芽孢杆菌组、空白组(PBS)和攻虫对照组。每组鸡口服相应菌液(0.3mL1010cfu/mL菌液/只)进行免疫,每隔2周免疫1次,共免疫3次,每次免疫2周后采血。三免2周后攻虫。采用ELISA方法检测各组鸡血清中EmIMP1的抗体滴度以及细胞因子IL-10和IL-4的含量;并对攻虫后各组鸡的增重、肠道病变计分以及卵囊排出量进行计算。结果显示:制备的重组枯草芽孢杆菌可以表达目的蛋白,蛋白大小为70ku。ELISA检测结果显示,EDA组的抗体效价最高,约为1∶3200;三免EDA组的IL-10和IL-4的含量均显著高于其它组(p<0.05);EDA组的卵囊排出量显著低于其它组,而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量也均显著低于攻虫组(p<0.05);EDA组对肠道保护效果显著优于其它经过攻虫处理的组(p<0.05),而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组之间无显著差异;EDA组增重显著高于攻虫组和枯草芽孢杆菌组(p<0.05)。本研究证实枯草芽孢杆菌作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。
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| 关 键 词： | 枯草芽胞杆菌 胞内表达 EDA佐剂 EmIMP1 巨型艾美耳球虫 |
Preparation and immune effect evaluation of recombinant Bacillus subtilis expressing EDA-EmIMP1 |
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| CHEN Zhi,DING Ke-xin,LIN Xia-lin,HUANG Xiao-hang,HUANG Zhi-jian,YIN Guang-wen.Preparation and immune effect evaluation of recombinant Bacillus subtilis expressing EDA-EmIMP1[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2019(4):408-413. |
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| Authors: | CHEN Zhi DING Ke-xin LIN Xia-lin HUANG Xiao-hang HUANG Zhi-jian YIN Guang-wen |
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| Institution: | (College of animal science,Fujian agriculture and forestry university/Fujian animal medicine engineering laboratory,Fuzhou 350002,China) |
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| Abstract: | CHEN Zhi;DING Ke-xin;LIN Xia-lin;HUANG Xiao-hang;HUANG Zhi-jian;YIN Guang-wen(College of animal science,Fujian agriculture and forestry university/Fujian animal medicine engineering laboratory,Fuzhou 350002,China) |
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| Keywords: | Bacillus subtilis intracellular expression EDA EmIMP1 Eimeria maxima |
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