| 应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA |
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| 引用本文： | 郭海龙,童光志,仇华吉,周艳君,兰文生,王云峰,吴东来.应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA[J].兽医大学学报,2003,23(3):278-280. |
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| 作者姓名： | 郭海龙 童光志 仇华吉 周艳君 兰文生 王云峰 吴东来 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 |
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| 摘 要： | 运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段，经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段，将余下的2个较大片段连接，并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物，从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体，重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定，验证无误后作为竞争性模板内对照，一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR，产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD)，经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴，取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴，绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明，本方法操作简单，结果可靠，稳定性高，适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。
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| 关 键 词： | 竞争PCR 定量检测 猪 IFN－γmRNA 序列测定 |
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