| 中内毒素（LPS）诱导后家蝇幼虫抗菌肽CecMd基因的克隆、生物信息学分析及其表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 赵平森,姜宁,张爱忠.中内毒素（LPS）诱导后家蝇幼虫抗菌肽CecMd基因的克隆、生物信息学分析及其表达载体的构建[J].兽医大学学报,2010(1):74-81. |
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| 作者姓名： | 赵平森 姜宁 张爱忠 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319 |
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| 基金项目： | 黑龙江农垦局科技重点项目（HNKX2V0902-05） |
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| 摘 要： | 从脂多糖（LPS）诱导或非诱导的家蝇幼虫体内抽提总RNA，根据家蝇Cecropin基因（GenBank：DQ 232774）设计特异性引物，应用RT—PCR技术扩增出编码CecMd开放阅读框（ORF）的eDNA序列，将其克隆入pMD18-T载体，经PCR、双酶切和测序鉴定正确后，将CecMd亚克隆基因与线性化的pET32a（＋）连接，构建重组表达载体pET32a（＋）／CecMid，并对此基因及其推导氨基酸序列进行系统的生物信息学分析。结果表明从脂多糖（LPS）诱导的家蝇幼虫体内成功的扩增出家蝇抗菌肽Cecropin基因，命名为CecMd，但是从未诱导的虫体内未能获得此基因；CecMd开放阅读框的cDNA全长为192bp，编码由63个氨基酸残基组成的多肽；此多肽最可能的裂解位点在氨基酸残基A23和G24之间，提示1～23氨基酸残基组成信号肽，24～63氨基酸残基构成成熟肽；CecMd的全长肽包含4个螺旋，成熟肽（不包括信号肽）含有2个螺旋，两者均不合二硫键；CecMd与果蝇Cecropins的同源性显著高于其他昆虫，达到81．0％以上；经PCR，限制酶切和DNA测序鉴定表明，成功构建了重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md 。重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md的构建及其CecMd基因的生物信息学分析对其生物学功能研究和高效表达工程菌的构建具有重要意义。
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| 关 键 词： | 家蝇 Cec Md 基因克隆 重组表达载体 生物信息学分析 |
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