| 新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达 |
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| 引用本文： | 经美,王建昌,崔元,李晓轩,陈萍,王金凤,侯绍华,孙继国,袁万哲.新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达[J].动物医学进展,2018(6). |
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| 作者姓名： | 经美 王建昌 崔元 李晓轩 陈萍 王金凤 侯绍华 孙继国 袁万哲 |
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| 作者单位： | 河北农业大学动物医学院;河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;河北省兽医生物技术工程技术研究中心 |
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| 摘 要： | 应用PCR方法扩增新型鸭细小病毒(NDPV)VP3基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-VP3。重组质粒pQE1-VP3经优化诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析并利用His标签抗体对表达的蛋白进行Western blot鉴定。结果表明,NDPV VP3蛋白在25℃、IPTG浓度为1.0mmol/L经诱导5h,可获得最大诱导表达量,表达蛋白的分子质量约为60ku,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可获得浓度为5.165 mg/mL及纯度为97%的VP3蛋白。获得的重组菌pQE1-VP3以及高纯度的VP3蛋白,为进一步研究NDPV检测方法和新型疫苗奠定了基础。
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