| A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因原核表达及间接ELISA方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 张曼,韩飞.A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因原核表达及间接ELISA方法的建立及应用[J].动物医学进展,2017,38(12):18-22. |
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| 作者姓名： | 张曼 韩飞 |
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| 作者单位： | 杨凌职业技术学院动物工程分院,陕西杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 陕西省科技攻关项目，杨凌区重大科技项目 |
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| 摘 要： | 原核表达A型副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum serotype A,Hpgserotype A)的血凝素蛋白HA,并以HA蛋白为包被抗原,建立血清间接ELISA检测方法。克隆Hpg HA基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组HA蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Western blot鉴定;用纯化后的HA蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏度和重复性试验,最后对临床样品进行检测。原核表达获得大小约为37ku的重组HA蛋白;Western blot结果表明重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。Hpg间接ELISA优化反应条件为:抗原包被量每孔500ng,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶2 500倍稀释作用1h,TMB显色时间为10min。在该优化条件下,OD_(450)≥0.34为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明对鸡新城疫病毒、禽流感病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对85份阳性血清进行检测,敏感性为98.8%;重复性试验结果表明,批内和批间OD_(450)值的变异系数分别1.5%~3.7%和6.5%~8%。用本试验建立的方法对临床上215份鸡血清样品进行检测,阳性率为25.1%。说明建立的ELISA检测方法可用于Hpgserotype A抗体水平的检测。
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| 关 键 词： | A型副鸡嗜血杆菌 血凝素蛋白 纯化 间接ELISA |
Prokaryotic Expression of HA Protein of Haemophilus paragallinarum Serotype A and Establishment and Preliminary Application of Indirect ELISA Detection Method |
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| ZHANG Man,HAN Fei.Prokaryotic Expression of HA Protein of Haemophilus paragallinarum Serotype A and Establishment and Preliminary Application of Indirect ELISA Detection Method[J].Progress In Veterinary Medicine,2017,38(12):18-22. |
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| Authors: | ZHANG Man HAN Fei |
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| Abstract: | |
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