| 双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备 |
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| 引用本文： | 吴秀萍,陆佳,张亮,李敏,朱曼玲,张旺东,何晚红,李建飞,王雯慧.双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备[J].动物医学进展,2019,40(12). |
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| 作者姓名： | 吴秀萍 陆佳 张亮 李敏 朱曼玲 张旺东 何晚红 李建飞 王雯慧 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州,730070 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 为制备抗双峰驼IgA的抗体,将双峰驼IgA重链恒定区基因克隆至pET-28a(+)上,构建重组蛋白质粒pET-28a-IgA-H,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化,以及SDS-PAGE和Western blot验证。用以获得的目的蛋白制备兔抗双峰驼IgA多克隆抗体,并通过ELISA和Western blot检测效价及其特异性。结果表明,获得的重组目的蛋白大小约为39ku,最佳诱导表达条件为IPTG 23.83μg/mL、诱导时间6 h,且重组蛋白主要以包涵体的形式表达。ELISA检测显示抗体效价达1∶32 000,Western blot鉴定抗体能特异性识别原核表达的pET-28a-IgA-H蛋白,并能有效地将双峰驼IgA与IgG区别开来,表明成功获得了双峰驼IgA重链恒定区的重组蛋白及特异性良好的多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 双峰驼 IgA 原核表达 抗体制备 |
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