| 沉默SCAP基因对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响 |
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| 引用本文： | 邢智洋,张梦璐,张菡,王月影,韩立强,高腾云,杨国宇.沉默SCAP基因对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响[J].畜牧兽医学报,2019(3):507-516. |
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| 作者姓名： | 邢智洋 张梦璐 张菡 王月影 韩立强 高腾云 杨国宇 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院农业部动物生化与营养重点实验室 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系专项资金(CARS-37);国家重点研发计划(2016YFD0500503);中国博士后基金(2016M592291);河南省自然科学基金(162300410152);河南省兽医学优势特色学科建设经费(203/18xk0102) |
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| 摘 要： | 旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响,本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体,包装感染奶牛乳腺上皮细胞,通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因沉默稳转细胞株,采用Real-time PCR和Western blot观察基因沉默细胞株中SCAP基因和蛋白的表达,尼罗河红和油红O染色脂滴检测SCAP基因沉默及SCAP质粒瞬时转染对细胞脂滴形成的影响。结果表明,本研究成功构建了奶牛SCAP基因沉默慢病毒重组载体,感染细胞后经过5 mg·L-1嘌呤霉素筛选得到SCAP基因沉默稳转细胞株。基因检测发现,各个沉默细胞株的SCAP基因表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,RNAi-SCAP3细胞中的SCAP蛋白表达降低为对照组的0.49倍(P<0.05),脂代谢基因SCD和FAS表达也显著下降(P<0.05)。脂滴染色发现,RNAi-SCAP3沉默细胞株的脂滴含量显著低于对照组细胞(P<0.01),脂滴直径≤2.0μm的小脂滴个数增多,而直径≥2.5μm的大脂滴个数减少;将SCAP真核表达载体瞬时转染RNAi-SCAP3细胞株后发现,SCAP基因的过表达显著减少了细胞中小脂滴比例而增加了大脂滴比例(P<0.05)。本研究成功构建了SCAP基因沉默稳转细胞株,发现SCAP的表达影响了细胞脂滴直径的大小。
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| 关 键 词： | 奶牛 奶牛乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因沉默 脂滴 |
Effect of Silencing SCAP Gene on Lipid Droplets in Dairy Mammary Epithelial Cells |
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| XING Zhiyang,ZHANG Menglu,ZHANG Han,WANG Yueying,HAN Liqiang,GAO Tengyun,YANG Guoyu.Effect of Silencing SCAP Gene on Lipid Droplets in Dairy Mammary Epithelial Cells[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2019(3):507-516. |
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| Authors: | XING Zhiyang ZHANG Menglu ZHANG Han WANG Yueying HAN Liqiang GAO Tengyun YANG Guoyu |
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| Institution: | (Key Laboratory of Animal Biochemistry and Nutrition of Ministry of Agriculture,College of AnimalScience and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China) |
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| Abstract: | XING Zhiyang;ZHANG Menglu;ZHANG Han;WANG Yueying;HAN Liqiang;GAO Tengyun;YANG Guoyu(Key Laboratory of Animal Biochemistry and Nutrition of Ministry of Agriculture,College of AnimalScience and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,China) |
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| Keywords: | dairy bovine mammary epithelial cell SCAP gene silencing lipid droplet |
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