| 副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析 |
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| 引用本文： | 张飞,都启晶,张洋溢,文心田,黄小波,曹三杰.副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析[J].畜牧兽医学报,2014(4):621-630. |
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| 作者姓名： | 张飞 都启晶 张洋溢 文心田 黄小波 曹三杰 |
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| 作者单位： | 四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心;四川农业大学动物医学院人兽共患病研究室;农业部兽用药物与兽医生物技术四川科学观测实验站 |
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| 基金项目： | 公益性行业(农业)科研专项(201303034-1) |
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| 摘 要： | 运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。
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| 关 键 词： | 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖输出蛋白基因 克隆表达 免疫原性 |
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