| 鸡毒霉形体TM-1基因原核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 郝永清,王秀青,周艳君,童光志,高金亮,赵振华,乌尼.鸡毒霉形体TM-1基因原核表达载体的构建及表达[J].中国兽医科技,2004,34(4):18-20. |
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| 作者姓名： | 郝永清 王秀青 周艳君 童光志 高金亮 赵振华 乌尼 |
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| 作者单位： | [1]内蒙古农业大学动物科学与医学学院，内蒙古呼和浩特010018 [2]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001 [3]中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州730046 |
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| 摘 要： | 对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒，进行EcoR Ⅰ和Sα／Ⅰ双酶切，获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3)，筛选阳性克隆。提取质粒，经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确，从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析，证明其分子质量约为29ku；Western-blotting分析表明，该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别，具有生物学活性。
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| 关 键 词： | 鸡毒霉形体 TM-1基因 原核表达 载体 生物学活性 克隆 质粒 PCR SDS—PAGE 分子质量 |
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