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| 动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立 | |
| 引用本文： | 王权,王巧全,潘淑娟,陈志强,陈永军,常小斌,李健.动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立[J].中国兽医寄生虫病,2007,15(6):1-7. |
| 作者姓名： | 王权 王巧全 潘淑娟 陈志强 陈永军 常小斌 李健 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200232 2. 上海出入境检验检疫局,上海,200135 3. 上海市青浦区动物疾病控制中心,上海,201700 4. 湖南农业大学,长沙,410128 |
| 基金项目： | 上海市科委标准专项;国家质量监督检验检疫总局科研项目 |
| 摘 要： | 目的为了建立一种快速、特异、灵敏检测动物源性食品中弓形虫的技术。方法根据原虫rDNA的部分序列,找出弓形虫和新孢子虫共同保守DNA片段,设计套式PCR两对引物,以UltraPureTM基因组DNA快速提取试剂盒提取弓形虫和新孢子虫DNA为模板,初步建立了检测两种虫体的Nested PCR技术。将纯化的Nested PCR产物成功地克隆到pGEM-T-easy载体中,经鉴定、测序并进行同源性分析。结果Nested-PCR的外、内引物对两种虫体rDNA基因均能进行扩增,长度分别在800~900 bp、400~500 bp之间。内引物扩增DNA序列与公布的同种虫体DNA序列同源性较高,弓形虫和新孢子虫分别达99.1%、97.2%,但它们两者之间差异较大,同源性仅为86.6%。用软件寻找能区别两者基因序列差异的酶切位点,挑选内切酶进行RFLP实验,结果表明新孢子虫NestedPCR扩增片段能被Vsp1酶切。同时进行该分子检测技术的特异性和敏感性试验,实验证明该Nested PCR能对弓形虫和新孢子虫rDNA基因进行特异性的扩增,而对其它原虫基因未能扩增出任何片段;该Nested-PCR能检测出100个弓形虫速殖子/g猪肉。结论本实验建立Nested PCR检测方法不仅可用于检测动物性食品中弓形虫,而且能明确区分弓形虫和新孢子虫。 |
| 关 键 词： | 弓形虫 新孢子虫 套式PCR 食品检测 |
| 文章编号： | 1005-0868（2007）06-0001-07 |
| 收稿时间： | 2005-03-07 |
| 修稿时间： | 2005年3月7日 |
ESTABLISHMENT OF NESTED PCR-RFLP FOR DETECTING TOXOPLASMA GONDII IN ANIMAL-DERIVED FOOD |
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| WANG Quan,WANG Qiao-quan,PAN Shu-juan,CHEN Zhi-qiang,CHEN Yong-jun,CHANG Xiao-bin,LI Jian.ESTABLISHMENT OF NESTED PCR-RFLP FOR DETECTING TOXOPLASMA GONDII IN ANIMAL-DERIVED FOOD[J].Chinese Journal of Veterinary Parasitology,2007,15(6):1-7. | |
| Authors: | WANG Quan WANG Qiao-quan PAN Shu-juan CHEN Zhi-qiang CHEN Yong-jun CHANG Xiao-bin LI Jian |
| Abstract: | |
| Keywords: | Toxoplasma Gondii Neospora Caninum Nested PCR RFLP food detection |
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