| L929细胞无血清悬浮驯化机器在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究 |
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| 引用本文： | 刘东慧,李兆才,梁林,谭书敏,闫海全,白天俊,王淑芳,闫文军,周继章.L929细胞无血清悬浮驯化机器在流产衣原体灭活疫苗中的应用研究[J].中国兽药杂志,2024,58(4):1-13. |
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| 作者姓名： | 刘东慧 李兆才 梁林 谭书敏 闫海全 白天俊 王淑芳 闫文军 周继章 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,,,,,,,,中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 |
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| 基金项目： | 甘肃省重点研发项目(21YF5FA152)；中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务专项项目(1610312021012)。 |
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| 摘 要： | 为了给规模化生产流产衣原体提供悬浮细胞培养方法，本研究通过逐步降血清悬浮驯化法使贴壁L929细胞逐步适应悬浮培养环境，最终获得了一株可无血清悬浮培养的L929细胞株；将流产衣原体接种于L929悬浮细胞上，研究不同的促感染试剂以提高收菌量，并选择出最佳的培养方法；制备流产衣原体灭活疫苗，以25 μL 、50 μL、100 μL的剂量免疫Balb/c小鼠，攻毒后检测其免疫保护效果。结果显示，当该L929悬浮细胞初始接种密度为5×105个/mL 时，培养72 h后细胞浓度可达到约7×106个/mL，细胞活力在95%以上；在细胞密度为6×106个/mL，接菌量为5.5×104 IFU/mL，加入脂质体2000的量为1.7 μL/mL、放线菌酮浓度为0.4 μg/mL时，菌量增殖倍数最大，48 h内约扩增了52倍。经流产衣原体悬浮细胞灭活疫苗免疫后，小鼠产生的抗体水平随免疫剂量的增加而提升；接种50 μL、100 μL疫苗组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平、IFN-γ、IL-2的含量远高于接种25 μL疫苗和注射PBS组的小鼠；对免疫后的小鼠进行攻毒，接种疫苗组小鼠的脾脏、十二指肠、子宫中的流产衣原体基因组含量远低于未接种疫苗组小鼠。注射PBS组及接种25 μL疫苗组的小鼠子宫出现了不同程度的坏死及炎症，而其余两组小鼠的子宫无异常变化。结果表明，本试验成功驯化出１株L929悬浮培养细胞株，并且通过悬浮培养工艺制备的流产衣原体灭活疫苗免疫效果良好，接种50 μL、100 μL该灭活疫苗可以有效抑制流产衣原体的感染，该L929细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化生产提供了科学依据。
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| 关 键 词： | L929贴壁细胞，悬浮培养驯化，流产衣原体，灭活疫苗，免疫评价 |
| 收稿时间： | 2023/11/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2024/4/9 0:00:00 |
Preliminary Evaluation of the Immunoprotective Effect in Mice of Chlamydia abortus Inactivated Vaccine using Completely Suspended Domesticated L929 Cells |
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| Institution: | State Key Laboratory for Animal Disease Control and Prevention,College of Animal Medicine and Biosafety,Lanzhou University,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,,,,,,,, |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Adherent L929 cell Suspension culture and acclimation Chlamydia abortus Inactivated vaccine Immunological evaluation |
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