| 基于3种抗原的融合表达蛋白建立牛分枝杆菌抗体ELISA检测方法 |
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| 引用本文： | 潘家良,于有利,刘梦婷,单玉平,汤芳,任建鸾,薛青红,薛峰,戴建君.基于3种抗原的融合表达蛋白建立牛分枝杆菌抗体ELISA检测方法[J].畜牧与兽医,2022(5):121-127. |
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| 作者姓名： | 潘家良 于有利 刘梦婷 单玉平 汤芳 任建鸾 薛青红 薛峰 戴建君 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学动物医学院;2. 连云港市畜牧兽医站;3. 中国兽医药品监察所 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2021YFD1800500)； |
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| 摘 要： | 为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法，以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原，通过酶切连接和重叠延伸PCR方法，将3个抗原基因串联在pET-28a载体上，基因之间用Linker序列连接，构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析，成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性；以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性，与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示，本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明，成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法，为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。
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| 关 键 词： | 牛分枝杆菌 诊断抗原 Rv3403c CFP10 ESAT6 融合表达 间接ELISA |
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