| 猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立 |
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| 引用本文： | 杨利,张浩明,李丁,郑其升,芮荣.猪瘟病毒中和性单克隆抗体制备及阻断ELISA方法建立[J].畜牧与兽医,2022(5):68-74. |
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| 作者姓名： | 杨利 张浩明 李丁 郑其升 芮荣 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学动物医学院;2. 江苏省农业科学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32002316)； |
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| 摘 要： | 采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠，经间接免疫荧光(IFA)筛选，获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证，上述单抗均具有CSFV中和活性，其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高，大于1∶10 240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体，配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原，建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8 000。通过对100份阴性猪血清的检测，确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高，对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性；特异性强，仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应，与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应；良好的可重复性，批内、批间变异系数分别为0.90%～3.21%、1.89%～6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示，该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场...
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| 关 键 词： | CSFV 高效中和抗体 阻断ELISA 毕赤酵母 重组CSFV E2蛋白 |
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