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现代诊断技术在兽医学上的应用及其进展 总被引：2，自引：0，他引：2
1 免疫酶技术 (ＥＩＡ)ＥＩＡ是根据抗原 -抗体结合的特异性 ,以酶作标记物 ,酶对底物具高效催化作用的原理而设计 ,既可用于抗原的检查 ,也常用于血清抗体的检测。1 .1 酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)ＥＬＩＳＡ是应用最广泛的免疫酶技术 ,包括间接法、夹心法、竞争法等。自ＶＯＬＬＥＲ和ＢＩＤＷＥＬＬ(1 975 )首先报道了应用间接ＥＬＩＳＡ方法检测病毒特异性抗体以来 ,ＥＬＩＳＡ方法已普遍应用于传染病的流行病学普查、抗体水平的评价以及疫苗质量的监控和标化等 ,迄今为止大多数动物病原体均已发展或报道了ＥＬＩＳＡ方法的研究与… 相似文献
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ELISA鉴别检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒抗体水平的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
猪腹泻症是一类严重影响养猪业发展的疾病 ,其中尤以病毒性腹泻难以防治。引起猪病毒性腹泻的主要病原有 :猪流行性腹泻病毒 (ＰＥＤＶ)、猪传染性胃肠炎病毒 (ＴＧＥＶ)和轮状病毒 (ＲＶ)。在生产实践中 ,这三种病毒往往在同一个猪场混合感染的情况比较多。本研究针对三种病毒混合感染的特点 ,采用ＥＬＩＳＡ检测猪ＰＥＤＶ、ＴＧＥＶ和ＲＶ抗体水平 ,为这三种病的合理预防提供依据。1 材料和方法1 .1 羊抗猪ＩｇＧ酶标记抗体的制备1 .1 .1 猪ＩｇＧ的提取 :采集健康母猪的初奶 1 0 0ｍｌ,按常规方法分离乳清 ,然后结合饱和硫酸铵沉淀法… 相似文献
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建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验一免疫过氧化物酶单层试验（Ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｍｏｎｏｌａｙｅｒａｓｓａｙ，ＩＰＭＡ）加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感。没有遇到在ＩＰＭＡ或间接ＥＬＩＳＡ中所见的底色深的问题。 相似文献
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建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测猪血清中猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（ＰｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅＶｉｒｕｓ，ＰＲＲＳＶ）抗体并与欧洲广泛使用的血清学诊断试验－免疫过氧化物酶单层试验加以比较。当使用野外血清和实验感染ＰＲＲＳＶ后早期采集的血清试验时发现，阻断ＥＬＩＳＡ是特异性的，而且比ＩＰＭＡ更敏感，没有遇到的在ＩＰＭＡ或间接ＥＬ 相似文献
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斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立 总被引：6，自引：0，他引：6
首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。 相似文献
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PPA-ELISA检测猪传染性胸膜肺炎抗体方法的建立 总被引：4，自引：0，他引：4
猪传染性胸膜肺炎是由猪传染性胸膜肺炎放线杆菌引起的 ,以急性胸膜肺炎为特征的猪的呼吸道传染病。该病发病率高 ,对养猪业危害极大 ,目前该病的实验室诊断方法主要依靠病原分离鉴定和间接血凝反应检测血清抗体。我们根据葡萄球菌Ａ蛋白 (ＳＰＡ)具有与哺乳动物血清中ＩｇＧＦｃ段结合 ,而与猪ＩｇＧ的亲和力最强的特点 ,将ＳＰＡ与辣根过氧化物酶偶联制备的酶标ＳＰＡ(ＰＰＡ) ,具有酶标第二抗体的性质 ,且应用范围广。依此 ,试图建立起ＰＰＡ酶联免疫吸附测定法 (ＰＰＡ-ＥＬＩＳＡ) ,检测猪传染性胸膜肺炎抗体的检验程序。1 材料与方法… 相似文献
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对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。 相似文献
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禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引：47，自引：1，他引：47
用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散 相似文献
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国内ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ技术检测与诊断应用研究西南农业大学动物养殖学院徐力蛟ＥＬＩＳＡ技术是８０年代迅速发展起来的新型快速高效诊断检测技术，以方便、快速、敏感为特征。它产生了许多分枝方法。酶标葡萄球菌Ａ蛋白－酶联免疫吸附试验（ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ）就是其... 相似文献
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猪瘟Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的研究黄骏明，朱庆虎（中国农科院哈尔滨兽医研究所）应用与猪瘟病毒有共同可溶性ＰＰ抗原的牛病毒性腹泻病毒ＯｒｅｇｏｎＣ。；Ｖ毒株制备抗原，进行免疫斑点试验（ＤＯｔ－ＥＬＩＳＡ）已成功地用于猪瘟血清抗体的监测［、’］。为了... 相似文献
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用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 … 总被引：1，自引：0，他引：1
朱红 《动物科学与动物医学》2000,17(5):51-52
用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。 相似文献
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用ELISA法检测犬细小病毒抗体 总被引：1，自引：0，他引：1
本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。 相似文献
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银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究 总被引：18，自引：1，他引：17
本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。 相似文献
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间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究 总被引：3，自引：1，他引：3
本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 相似文献
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用活的和灭活的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）接种鸡，以ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔ ｅｒｎ印迹（ＷＢ）试验测由单一结构蛋白Ｓ１、Ｓ２、Ｍ和Ｎ所引起的抗体反应。无论用活的或灭活的ＩＢＶ接种，４种结构蛋白均在鸡体内激发抗体反应。用活的ＩＢＶ接种后，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白诱导相似效价的抗体，而Ｍ糖蛋白诱导的抗体滴度明显较低，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白的ＥＬＩＳＡ抗体出现时间和形成过程相似。均在接种后２周首次检到，且和病毒中和 相似文献
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为了建立一种快速、敏感、特异的检测犬冠状病毒（ＣＣＶ）的方法,利用感染ＣＣＶ的犬肾传代细胞包被酶联反应板,以辣根过氧化物酶标记的金黄色葡萄球菌Ａ蛋白（ＨＲＰ－ＳＰＡ）作为第２抗体,建立了检测ＣＣＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。抗原的包被量为每孔３×１０４个染毒细胞,酶标抗体的工作浓度为１∶４０。试验发现,包被的病毒抗原经甲醇固定３０ｍｉｎ后可以提高试验的敏感性,减少病毒抗原的使用量。与中和试验比较证实,２种抗体检测方法的测定结果呈正相关 相似文献
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用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒（ＬａＲＶ）抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＳＩＡ、病毒分离培养、电镜、荧光抗体等作了实验室和临床应用比较，结果证明单抗－ＥＬＩＳＡ一步法敏感、特异、快速、简便、适于基层临床推广应用 相似文献
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检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体ELISA方法的建立 总被引：19，自引：0，他引：19
本试验通过差速离心法和非线性蔗糖密度梯度离心法纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）。经三氯－三氟乙烷处理后,作为ＥＬＩＳＡ试验的标准抗原,并建立了检测ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ方法。该方法与ＩＦＡ、ＩＰＭＡ和国外同类商品化试剂盒进行了对比试验,表明该方法具有敏感性高、特异性好的特点,是一种快速准确检测ＰＲＲＳＶ抗体的方法。间接ＥＬＩＳＡ方法在敏感性上要优于ＩＦＡ和ＩＰＭＡ》 相似文献
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应用斑点酶联免疫吸附试验快速检测传染性法氏囊病病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
对传染性法氏囊病(ＩＢＤ)的实验室诊断,过去多用琼扩试验、中和试验等方法,但这些方法或不敏感、或受条件限制不易推广。为此,作者利用酶标单克隆抗体建立了快速检测ＩＢＤＶ的Ｄｏｔ-ＥＬＩＳＡ方法,对人工感染样品和现场发病或感染鸡群的检测获得满意结果。1 材料和方法1.1 材料1.1.1 病毒:ＩＢＤＶ强毒Ｊ1Ｃ7Ｅ6购自中国兽医药品监察所,新城疫病毒(ＮＤＶ)、传染性支气管炎病毒(ＩＢＶ)、传染性喉气管炎病毒(ＩＬＴＶ)由扬州大学农学院微生物组提供。1.1.2 ＩＢＤＶ标准阳性血清和ＳＰＦ鸡血清:扬州大学农学院微生物组提供。ＩＢＤ… 相似文献