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对重组X-33毕赤酵母菌株表达的鸡源Fowlicidin-3抗菌肽的条件进行优化,并研究了表达产物的生物学活性.结果表明:当含有重组酵母菌的BMGY培养基A600值达到5-6时,转接pH 6.0的BMMY培养基,每24 h补加2%甲醇,29℃条件下培养72 h,重组鸡源Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达,含量达到170 mg·L-1.采用琼脂孔扩散法对该抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性等特性进行分析,结果表明:鸡源Fowlicidin-3抗菌肽具有较强的热、酸稳定性;对致病性大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌和金黄色葡萄球菌Cowan Ⅰ的最小抑菌浓度分别为3.12、1.56和1.56μg·mL-1.在对大肠杆菌O1感染雏鸡的体内疗效试验中,鸡源Fowlicidin-3显示出了较好的预防和治疗效果. 相似文献
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【目的】用白痢鸡粪培养蝇蛆,探究蝇蛆抗菌肽对鸡白痢沙门菌感染雏鸡的治疗效果。【方法】用鸡白痢沙门菌感染雏鸡,收集雏鸡粪便培养蝇蛆,粗提蝇蛆抗菌肽,测定其含量和抑菌活性,试验同时设健康鸡粪便培养的蝇蛆抗菌肽作为对照。分别用白痢鸡粪和健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽治疗白痢病鸡,测定其肠道细菌数量和治愈率,试验同时设抗生素组(恩诺沙星)和未治疗对照组。【结果】白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽含量显著高于健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽(P0.05);2种鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽对大肠埃希菌、沙门菌和葡萄球菌均有抑制作用,但白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽的抑菌活性显著高于健康鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽(P0.05);蝇蛆抗菌肽治疗白痢病鸡后,白痢鸡肠道细菌数量显著低于对照组(未治疗组)(P0.05),稍高于抗生素治疗组(P0.05),但白痢鸡肠道细菌数量均达到健康鸡的标准范围。白痢鸡粪培养蝇蛆抗菌肽组的治愈率为43.33%,与健康鸡粪培养蝇蛆抗菌肽组和抗生素组差异不明显。【结论】白痢鸡粪培养的蝇蛆抗菌肽对沙门菌感染的鸡白痢病具有治疗作用。 相似文献
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鸡源抗菌肽Folicidin-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物学活性鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
【目的】研究鸡源重组抗菌肽Fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中Fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114bp的Fowlicidin-3基因。将Fowlicidin-3基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-F。将线性化重组表达载体pPICZα-A-F通过电击法转入毕赤酵母宿主菌X-33中,构建分泌型重组酵母表达菌株。【结果】获得分泌型重组酵母表达菌株,Fowlicidin-3多肽表达量达到170mg·L-1,对致病性大肠杆菌K99和鸡白痢沙门氏菌显示出较好的抑制活性,抑菌圈直径分别为1.9cm和2.2cm。优化表达条件结果显示,转接到BMMY培养基中(pH6.0),每24h补加2%甲醇,29℃培养72h后,Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达。【结论】成功构建分泌型重组酵母表达菌株,并获得了具备高效表达能力和较好生物学活性的抗菌肽。 相似文献
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【目的】研究鸡源重组抗菌肽Fowlicidin-3的生物学特性,并为重组抗菌肽在临床上的应用奠定基础。【方法】根据抗菌肽数据库中Fowlicidin-3的氨基酸序列,选用毕赤酵母的偏嗜密码子,设计抗菌肽的基因,通过SOE法合成得到全长为114 bp的Fowlicidin-3基因。将Fowlicidin-3基因克隆入pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-F。将线性化重组表达载体pPICZα-A-F通过电击法转入毕赤酵母宿主菌X-33中,构建分泌型重组酵母表达菌株。【结果】获得分泌型重组酵母表达菌株,Fowlicidin-3多肽表达量达到170 mg?L-,对致病性大肠杆菌K99和鸡白痢沙门氏菌显示出较好的抑制活性,抑菌圈直径分别为1.9 cm和2.2 cm。优化表达条件结果显示,转接到BMMY培养基中(pH 6.0),每24 h补加2%甲醇,29℃培养72 h后,Fowlicidin-3抗菌肽获得高效表达。【结论】成功构建分泌型重组酵母表达菌株,并获得了具备高效表达能力和较好生物学活性的抗菌肽。 相似文献
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鸡肠道抗菌肽Gal-13的乙酸提取及其工艺优化 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索鸡肠道抗菌肽的乙酸提取方法,并寻找乙酸提取的最佳条件。【方法】采用乙酸浸提法从鸡肠道中提取抗菌肽,并通过琼脂糖弥散方法检测每步产物的活性,用最小抑菌浓度(MIC)法测定提取物对巴氏杆菌的相对抑菌效价来检测提取率。【结果】从鸡肠道黏膜分离到的抗菌肽是Gal-13的前片段和成熟肽,其相对分子质量约为7.71 ku。乙酸提取的最佳条件是:乙酸4℃浸提24 h,Gal-13的提取率较高,为0.1%。【结论】鸡肠道黏膜的抗菌肽主要是Gal-13。 相似文献
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《江西农业学报》2022,(9)
为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。 相似文献
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抗菌肽NK-lysin生物信息学分析及其抑菌作用研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为分析猪源抗菌肽NK-lysin的理化性质和蛋白结构,并研究猪源抗菌肽在小鼠体内的抑菌效果,以猪小肠组织cDNA为模板进行PCR扩增和测序,通过生物信息学相关软件和工具对其测序结果进行分析。试验选用60只小鼠,随机分为4组(预防组、细菌模型组、治疗组和对照组),设置不同的大肠杆菌和猪源抗菌肽给药方案。结果表明,猪源抗菌肽NK-lysin为稳定的,半衰期在大肠杆菌中(体内)长,与白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和颗粒性蛋白B(Granzyme B,GZMB)具有相互作用;预防组和治疗组小鼠存活率分别为80.00%和86.67%。综上所述,猪源抗菌肽在小鼠体内安全且具有一定的抑菌作用。 相似文献
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【目的】建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。【方法】通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数10%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经CM-Sepharose Fast Flow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度。【结果】共获得鸡抗菌肽粗提物0.270 g,经RP-HPLC分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰,其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌E.coliO78(峰13)、金黄色葡萄球菌S.au-reus1056MRSA(峰15)和白色念珠菌C.albicansATCC10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/mL。【结论】该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定。 相似文献
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应用氯化铵裂解、超声波破碎、离子交换层析和SDS—PAGE电泳等方法,对不同品种鸡白细胞中的抗菌肽成分进行了初步提取和分离,再用反相高效液相色谱法进一步分离和提纯．经微量琼脂糖弥散法初步检测体外抗菌活性后,利用微量稀释培养法分别检测了粗提抗菌肽对7个受试菌株的最小抑菌浓度（M1C）．结果表明,在鸡白细胞颗粒中存在着天然抗微生物活性物质,对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌和真菌均具有抑制活性,且不同品种鸡粗提抗菌肽的体外抑菌浓度存在显著差异,其中罗曼褐壳蛋鸡粗提抗菌肽的抗菌活性最高,其次是三黄肉鸡,而罗斯308肉鸡较差． 相似文献
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水产动物抗菌肽研究的最新进展 总被引：2，自引：0，他引：2
张家国 《大连水产学院学报》2009,(Z1)
抗菌肽是一类具有抗菌活性的生物短肽,广泛存在于生物界中。作者综述了抗菌肽的几种类型及其作用机理,并重点介绍了水产动物抗菌肽的研究现状,探讨了抗菌肽作为饲料添加剂在水产养殖业的应用前景。 相似文献
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以野生家蝇干燥幼虫为原料,在常规的生化提取基础上,通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)法进一步纯化,并结合电洗脱技术,利用灵敏的杀菌活性检测手段,从家蝇抗菌肽总组分中分离纯化出1个20 ku的抗菌肽,对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌均有杀灭作用。 相似文献
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为了获得具有高抗菌活性和低溶血活性的抗菌肽,利用家蝇抗菌肽Cec Md和中国林蛙抗菌肽Chensirin,设计出杂合抗菌肽Cec Md-Che Rc,并构其克隆载体。选取Cec Md的N端和Chensirin的C端氨基酸序列组成杂合肽,通过互联网和计算机软件,分析比较杂合肽的特征参数并进行结构预测。采用重复序列PCR方法合成2条杂合肽Cec Md-Che Rc I和Cec Md-Che Rc IV的基因,并连接到克隆载体pMD18-T上。分析发现杂合抗菌肽中Cec Md-Che Rc I疏水性最强,Cec Md-Che Rc IV净正电荷数最高;两者N端为疏水性α螺旋结构,C端为亲水性α螺旋结构;两者疏水性氨基酸大体分布在螺旋轮的一侧,其余氨基酸分布在另一侧;带正电荷的氨基酸主要分布在亲水面上。2条杂合肽的基因大小分别为133 bp和124 bp;PCR、双酶切和测序鉴定表明成功地构建了克隆载体pMD18-T/Cec Md-Che Rc I和pMD18-T/Cec Md-Che Rc IV,为后续研究奠定了基础。 相似文献
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中药增效抗菌复方对人工诱发鸡大肠杆菌病的疗效试验 总被引：1，自引：0，他引：1
根据传统中兽医理论,中药增效抗菌复方由黄芩、秦皮、白头翁、苦参和甲氧苄啶按比例组成.采用人工诱发雏鸡大肠杆菌病的方法,以对分离株大肠杆菌较敏感的环丙沙星作为对照组,进行中药增效抗菌复方的预防和治疗试验,探索中药增效抗菌复方对鸡大肠杆菌病的防治效果.结果表明,预防用药组雏鸡的发病率和死亡率明显低于感染对照组,中、高剂量的... 相似文献