法氏囊活性肽在大肠杆菌中的克隆与表达   总被引：7，自引：0，他引：7  

张焕玲  钱建飞  侯艳红  李银  郝勤宗  裘教宗  张则斌  陈溥言  杨奎 《中国预防兽医学报》2003,25(1):29-32

法氏囊活性肽（Bursin,BS)作为一种免疫增强剂，临床应用广泛，为了大量制备BS，按大肠杆菌惯用密码子合成BS基因。并用色氨酸将5个BS基因串联，克隆于质粒pU57的SmaI位点，经测序证明序列正确后，以PCR扩增，克隆于表达载体pBV220的EcoRI,HinDⅢ位点，温敏诱导表达，其表达水平占全菌总蛋白的13.4%。  相似文献   

伪狂犬病病毒上海株gE和gI基因的克隆及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

姜焱  陈溥言 《中国预防兽医学报》2002,24(4):245-248

参考Genebank发表的伪犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）的gI和gE基因序列，自行设计并合成了两对引物，对PRV上海株（PRV－SH）进行PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，均呈现一条约960bp和1740bp的条带，将其克隆入pGEM-T-easy载体中，进行了序旬测定，将PRV－SH株的gI基因与Rice株gI基因比较发现,核苷酸的同源性为94.7%，氨基酸的同源性为91.3%，证实为gI基因，将PRV－SH gE基因序列与Ea株、Ruce株gE基因序列进行比较，结果显示，该序列与PRV Ea株、Rice株gE基因的同源性分别为98.5%、97.5%；的氨基酸序列与Ea株，Rice株和I型单纯疱疹病毒（HSV－1）17株gE的同源性分别为97.2%、94.8%和15.6%。  相似文献   

禽痘病毒表达载体在兽用重组疫苗中的应用     

陈平洁  林勇  余业东  陈溥言 《中国兽医杂志》2004,40(10):36-38

禽痘病毒表达载体是已构建表达外源基因的病毒载体中的一种，它在表达外源基因上具有明显的优势：(1)它的基因组结构庞大，能耐受较大的外源基因(25～35kb)在其基因组的不同位点插入。(2)严格的胞浆内复制，避免了病毒基因重组入宿主细胞染色体的可能性。且禽痘病毒的宿主范围较窄，仅感染禽类，在哺乳动物体内仅产生一过性感染，安全性较高。(3)表达产物(蛋白质)在翻译后的加工修饰过程与体内极为相似，因此活性高。且保留了相应的抗原性、免疫原性。基于这些特点，使得禽痘病毒载体不仅可作为禽源疫苗，而且还可作为哺乳动物乃至人类的基因工程活载体疫苗，具有广阔的应用前景。  相似文献   

生长抑素(SS)与硫氧还原蛋白(Thioredoxin)相融合生成的2种基因工程化融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达特性   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘永庆  陈溥言  杜念兴  赵国屏 《中国兽医学报》2003,23(2):172-176

对基因工程化生长抑素（somatostatin,SS)-硫氧还原蛋白（Thioredoxin)融合蛋白SS－N／X和SS－N／S的表达产量、水溶性、Triton X-100对SS融合蛋白水溶性的影响、包涵体的溶解和复性特点以及SS的抗原性与免疫原性等特性进行了研究。结果显示，在30℃的低温下用IPTG诱导表达，SS－N／X融合蛋白主要以可溶性形式存在，占75．8％，色涵体仅占24．2％；而SS－N／S融合蛋白则主要以包涵体的形式存在，占81．1％，可溶性蛋白仅占18．9％；32C载体（pEG-32C)蛋白则居二者之间，可溶性蛋白与包涵体大约等比例出现。SS－N／S在低温下诱导可超量表达SS融合蛋白，其表达量约占菌体总蛋白的40．94％。0．5％ Triton X-100对融合蛋白的不溶性有非常显著的影响，几乎可使所有的SS－N／X融合蛋白和大部分SS－N／S融合蛋白及32C硫氧还原蛋白变成水溶性的。32C硫氧还原蛋白包涵体在尿素中的溶解度明显高于SS－N／S包涵体，2mol/L尿素可使近一半的32C硫氧还原蛋白包涵体溶解，而SS－N／S包涵体只有27．5％溶解；但在5mol/L尿素时，两者均可基本全部变为可溶性的。在SS融合蛋白包涵体溶解时加入还原剂二硫苏糖醇，可明显降低SS的抗原性。SS融合蛋白（水溶性融合蛋白和复性后的包涵体）具有良好的SS抗原性和免疫原性。由SS融合蛋白与弗氏不完全佐剂制成试验用疫苗，免疫BALB／c小鼠、仔猪和羔羊等动物，可显著提高免疫动物的增重。  相似文献   

法氏囊活性肽对鸡体增重及饲料转化率的影响   总被引：3，自引：0，他引：3  

侯艳红  钱建飞  张焕铃  郝勤宗  裘孝良  凌雯  李银  张则斌  陈溥言  杨奎 《畜牧与兽医》2002,34(9):8-10

把不同剂量的法氏囊活性肽 (BS)冻干粉与传染性法氏囊病 (IBD)活苗混合后 ,对 2 1日龄SPF鸡滴鼻点眼 ,同时另选一批同样生长状态的鸡 ,在颈部皮下接种IBD细胞毒油苗 ,同时肌肉注射上述不同剂量法氏囊活性肽 ,观察法氏囊活性肽对鸡生长性能的影响。结果发现 :免疫后7d ,活苗 0 2mLBS组增长最快 ,比免疫对照组多增 82 5 % ,并且饲料报酬高。但从整个试验期看 ,0 4mLBS组增重效果较好 ,比免疫对照组多增 1 9 8% ,并且有较高的饲料转化率。而肌肉注射BS组中 ,高剂量 (0 8mL)BS组的增重效果一直很好 ,比对照组总增重平均多增 7 2 3 % ,并有较高的饲料报酬。这说明滴鼻点眼或是肌肉注射 ,BS都有促生长的作用  相似文献   

种公猪精液中猪瘟和蓝耳病病毒混合感染的快速检测   总被引：2，自引：3，他引：2  

周斌  吴增坚  贾赟  陈溥言 《畜牧与兽医》2005,37(5):1-3

参考GenBank公布的猪蓝耳病病毒(PRRSV)VL2332株、LV株以及猪瘟兔化弱毒(CSFV)C株的基因序列,各设计合成了一对引物,建立了在相同PCR扩增条件下能同时检测PRRSV和CSFV的RT-PCR方法。对2003~2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的17个大中型猪场送检的186份种公猪精液进行了检测,结果18份呈PRRSV阳性,24份呈CSFV阳性,其中有11份为PRRSV和CSFV的混合感染,约占送检精液样品的5.91%。试验结果表明,所建立的RT-PCR方法可用于精液中这2种野毒感染的快速鉴定和分子流行病学调查。  相似文献   

不同结构对囊素样肽的免疫活性影响     

宗玉霞  卢宇  郑其升  侯继波  陈溥言 《兽医大学学报》2012,(11):1689-1693

化学合成单拷贝（BS）、30拷贝串联（KG30）和30拷贝分支结构（MAP）3种不同结构的囊素样肽，通过体外外周血淋巴细胞刺激增殖试验、杂交瘤细胞抗体分泌刺激试验、E-玫瑰花环试验和体内小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、新城疫疫苗免疫应答的测定，比较了其免疫增强活性。结果表明，BS和MAP的活性显著高于KG30，BS体外试验活性优于MAP，而MAP体内试验活性优于KS。结构对囊素的活性有显著影响，以分支结构的囊素增强免疫效果最好。  相似文献   

犬传染性肝炎病毒单克隆抗体的研究——Ⅰ.杂交瘤细胞株的建立     

马志勇  陈溥言  蔡宝祥 《中国预防兽医学报》1991,(3)

用从病犬分离的犬传染性肝炎病毒(ICHV)免疫BALB/C 小鼠,取其脾细胞与 SP_2/O 骨髓瘤细胞融合,通过 HI 试验筛选出4株分泌抗 ICHV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株(C_2B_5、C_4B_8、D_4E_4、G_(10)C_(10))。HI 试验和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)进行特异性鉴定表明:4株单抗与鸡新城疫病毒(NDV)、牛腺病毒(BAV)、禽腺病毒(Oet株)、犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)均无反应,仅与 ICHV 苗德株反应。杂交瘤细胞株在液氮中保存3个月复苏,仍可分泌特异性抗体。  相似文献   

DIG核酸探针检测病鸡羽髓MDV的研究     

李光富  陈溥言  蔡宝祥  张林元  邓小昭  刁振宇  陈华标 《中国预防兽医学报》1995,(5)

拔取病鸡含羽髓的羽毛,用免疫琼扩试验检测,检出率为80％;将病鸡羽髓经超声波处理、SDS和蛋白酶K裂解、经酚和氯仿抽提后,用乙醇沉淀病毒核酸,用我们研制的以Digoxigenin标记的MDV核酸探针检测,检出率为100％。结果表明,核酸探针是检测MDV灵敏特异的方法。  相似文献   

如何应对猪瘟病毒“变脸”——透视猪瘟免疫失败现象分析和防治措施   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈溥言 《中国动物保健》2007,(9):65-66,68

目前我国动物传染病的流行形势十分复杂和严峻,猪瘟起了推波助澜的作用。猪瘟免疫失败现象目前虽然比较普遍,但是可以解决的。专家强调指出,控制猪瘟重点应放在严格控制种猪,科学经济地淘汰带毒种猪。母猪体内垂直感染的小猪,出生小猪不能免疫识别猪瘟病,或猪瘟疫苗。猪瘟疫苗免疫对于猪瘟带毒仔猪没有免疫效果。这是猪瘟免疫失败现象的主要原因。中国系猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）目前是公认的世界最好的猪瘟疫苗,应宣传和肯定。但目前应做的是提高猪瘟兔化弱毒疫苗产品质量。猪场应掌握评价疫苗使用效果的方法,知道如何使用疫苗,何时接种疫苗及疫苗的接种效果。要实现彻底阻止野毒传播、控制和消灭猪瘟这一目标,仅仅依赖于疫苗免疫接种是不够的。猪瘟之所以长期流行与猪瘟病毒致病机理尚不清楚和猪场的卫生防疫措施、饲养管理、环境条件等密切相关。现在的集约化猪群,特别是一些高产猪群,其生理功能严重受到抑制,对疫病易感性增加。所以,控制和消灭猪瘟流行需要从包括免疫接种在内的一系列管理及防疫措施着手。强调流行病学综合防治为主,切断传染病发生的三个重要环节（即病原、宿主、环境）,相互联系的因素中的任何一个因素,传染病就不会发生。这也是成功控制猪瘟流行的最有效办法。[编者按]  相似文献