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《畜牧兽医学报》2016,(4)
为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P0.05)。通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究。 相似文献
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猪黑素皮质激素受体-4(melanocortin-4 receptor,MC4R)基因是影响猪生长肥育的主效基因之一,为了进一步研究MC4R基因的生物学功能,制备高成活率转基因猪,通过采用条件性诱导表达载体系统,PCR方法扩增了猪MC4R基因完整编码区,四环素诱导表达系统(Tet-on)的启动子调控区与转录调节元件。采用双酶切和连接等方法将上述元件连接到pcDNA3.1(+)上,构建了重组质粒pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R。经双酶切和测序鉴定,结果显示片段正向连接且片段全长测序正确。试验成功构建了四环素诱导的pcDNA3.1(+)-rtTA-PTight-MC4R真核表达载体, 并能在时间特异性方面调控MC4R基因的表达。 相似文献
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人和几种动物的遗传学研究显示，MC4R基因在体重和能量平衡调控中具有重要作用，但未见有关犬的MC4R基因多态性、MC4R基因与性状关系的研究报道。以123只成年Beagle犬为试验材料提取血液DNA，利用软件设计PCR引物，经PCR扩增、克隆和测序后，发现了一个新的MC4R基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)。该多态性恰好产生了限制性内切酶EcoO109Ⅰ的位点多态性。利用PCR-RFLP方法，分析了Beagle犬家系的MC4R基因，并利用SPSS软件分析该多态性与犬体重的关系。结果分析显示：MC4R该多态位点对犬的体重影响不显著。尚需进一步分析MC4R基因的其他片段。 相似文献
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为检测黑色素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)基因型在不同毛色猪种中的分布,研究该基因在猪毛色决定中的地位和作用,本试验使用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法对军牧1号白猪、杜洛克猪、西藏小型猪和大白猪的MC1R基因型进行了检测。结果显示,长白猪、大白猪存在nt894insCC和G1197A突变;杜洛克猪存在G668C、C1318T和G1554A突变;西藏小型猪存在C1318T和G1554A突变,而在nt894insCC位点则表现出其他基因型。通过对4个猪种的MC1R基因型的检测,为研究MC1R基因对毛色的作用机理奠定了基础。 相似文献
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目的：克隆犬黑素皮质素受体-4（Melanocortin-4 receptor，MC4R）基因片段，寻找其多态性位点。方法：根据犬、人和鼠等的MC4R基因序列，设计MC4R基因特异PCR引物。提取：本地犬基因组DNA，PCR扩增MC4R基因部分片段，回收纯化，连接载体，转化入感受态细胞，扩大培养。质粒酶切鉴定后，送测序公司测序。结果：本地犬MC4R基因片段有2处A碱基缺失突变。结论：本地犬中存在MC4R基因的多态性。本实验的MC4R两处缺失突变可能影响转录而引起：MC4R基因功能的改变。 相似文献
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副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。 相似文献
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试验旨在对陆川猪黑皮质激素受体4（melanocortin-4 receptor,MC4R）基因进行克隆及相关信息学分析。通过提取陆川猪背最长肌总RNA,采用RT-PCR、克隆等方法获得含目的基因MC4R的质粒pMD18-T-MC4R,经菌落PCR和测序鉴定正确后,应用相关生物信息学软件对陆川猪MC4R基因的理化性质、蛋白质的结构、修饰结构和亚细胞定位等进行预测分析。结果表明,MC4R基因CDS区长999 bp,编码332个氨基酸,与NCBI上公布的野猪MC4R基因序列中的CDS区存在4个碱基差异,其中175和906 bp处为同义突变,110和278 bp处为错义突变,分别引起第37位谷氨酸变为甘氨酸和第93位缬氨酸变为丙氨酸。同源性比对结果发现,MC4R基因在不同物种及进化的过程中具有较高的保守性。陆川猪MC4R蛋白有明显的疏水区域,不存在信号肽,但有7个跨膜结构域,其编码蛋白的二级结构元件有α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲。修饰结构预测表明,MC4R蛋白存在多处N糖基化位点,但无O糖基化位点,可能主要分布于内质网和囊泡。本研究成功克隆了陆川猪MC4R基因,为更好地开发利用地方品种陆川猪及其繁育奠定理论基础。 相似文献
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试验旨在对陆川猪黑皮质激素受体4(melanocortin-4receptor,MC4R)基因进行克隆及相关信息学分析。通过提取陆川猪背最长肌总RNA,采用RT-PCR、克隆等方法获得含目的基因MC4R的质粒pMD18-T-MC4R,经菌落PCR和测序鉴定正确后,应用相关生物信息学软件对陆川猪MC4R基因的理化性质、蛋白质的结构、修饰结构和亚细胞定位等进行预测分析。结果表明,MC4R基因CDS区长999bp,编码332个氨基酸,与NCBI上公布的野猪MC4R基因序列中的CDS区存在4个碱基差异,其中175和906bp处为同义突变,110和278bp处为错义突变,分别引起第37位谷氨酸变为甘氨酸和第93位缬氨酸变为丙氨酸。同源性比对结果发现,MC4R基因在不同物种及进化的过程中具有较高的保守性。陆川猪MC4R蛋白有明显的疏水区域,不存在信号肽,但有7个跨膜结构域,其编码蛋白的二级结构元件有α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲。修饰结构预测表明,MC4R蛋白存在多处N糖基化位点,但无O糖基化位点,可能主要分布于内质网和囊泡。本研究成功克隆了陆川猪MC4R基因,为更好地开发利用地方品种陆川猪及其繁育奠定理论基础。 相似文献
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猪的行为及其在养猪生产中的应用 《畜牧与饲料科学》2016,37(3):92-92
猪的行为是猪对其生活环境和饲养方式等综合反应的表现,在集约化饲养条件下,猪的行为问题非常严重。主要概述了猪的采食行为、排泄行为、社会行为、母性行为和异常行为,并分析其在饲养管理过程中的应用,旨在为养猪从业人员正确认识猪的行为表现,并施以科学的饲养管理和利用措施提供参考,从而提高猪群生产性能和养猪效益。 相似文献
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利用10个微卫星位点对南阳黑猪和栾川黑猪的遗传关系进行研究。计算并统计了平均观察等位基因数、平均有效等位基因数、平均多态信息含量、平均期望杂合度、平均观察杂合度、遗传相似系数和遗传距离等遗传参数,并进行t检验分析。结果表明,10个微卫星位点在南阳黑猪46个个体中共检测到116个等位基因,平均每个位点有11.6个等位基因;在栾川黑猪30个个体中共检测到88个等位基因,平均每个位点8.8个。各遗传参数t检验分析结果显示:南阳黑猪与栾川黑猪间均有极显著性差异(P<0.01)。南阳黑猪和栾川黑猪群体间遗传相似系数为0.7317,遗传距离为0.3124。研究表明,南阳黑猪与栾川黑猪两群体间存在显著遗传分化,因而可能属于不同的黑猪品种。 相似文献
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大河猪与大河乌猪的肌肉营养成分分析 总被引：5，自引：1，他引：4
以中国地方猪种大河猪和以大河猪为母本选育形成的培育品种大河乌猪为研究对象,研究了2个猪种肌肉的氨基酸和脂肪酸组成情况。结果表明:以肉质性状优良闻名于世的大河猪及含有大河猪血缘的大河乌猪肌肉中有丰富的氨基酸含量。其中含量最多的是谷氨酸,2个品种的肌肉中分别达到12.12%和12.32%。含量最少的是蛋氨酸和脯氨酸,2个品种肌肉中蛋氨酸含量分别为1.75%和1.79%,脯氨酸分别为2.54%和2.57%。两品种间各种常见氨基酸的组成差异均不显著(P>0.05)。对肌肉中脂肪酸组成的分析结果表明,2个实验猪种在肌肉中脂肪酸总量、饱和脂肪酸以及不饱和脂肪酸含量等各方面指标都较高,尤其是单不饱和脂肪酸含量的比例较高,这说明其营养价值和食用品质高,也部分解释了中国地方猪种肉脂特性优良的形成原因。 相似文献
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旨在探究五指山猪和杜洛克猪免疫和脂质代谢相关基因的选择信号差异。本研究从海南国家级五指山猪保种场采集30头4月龄健康(10公,20母)五指山猪的耳组织进行全基因组重测序(whole genome sequencing,WGS),从NCBI数据库下载29头杜洛克猪全基因组重测序数据(SRA：PRJNA378496);通过生物信息学方法分析59个样本WGS数据的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNPs),进行SNPs过滤,定位SNPs在基因组的位置,分析其结构特征和基因型频率,并注释对应基因的功能;使用XP-CLR方法筛选五指山猪基因组受到强烈选择的区域,分析两个品种相关通路基因的功能差异。结果表明,五指山猪平均每个样本共筛选到36 961 902个SNPs位点,内含子区域分布最多,平均每个样本16 729 364个,约占45.26%,编码区(起始、终止密码子)平均有2 073个SNPs;五指山猪受选择的基因组区域主要集中在免疫、代谢和神经功能相关通路;免疫反应通路中,9个基因(TGFBR2、IL26、IL15、BMPR2、TNFSF15、TNFSF4、TNFSF8、ACKR4、TNFRSF11B)功能区域SNPs位点在五指山猪中只存在一种突变纯合基因型,而在杜洛克猪大部分个体中存在3种基因型(野生纯合基因型、杂合子、突变纯合基因型),其中野生纯合基因型比例最高;脂类代谢通路中,关键调节基因IRS2、PRKG1、ADCY5的基因型频率与免疫反应基因类似。在五指山猪中突变纯合基因型比例为100%,在杜洛克猪中野生纯合基因型所占比例为48%~93%(14/29-27/29)。本研究筛选出与五指山猪免疫性状相关的候选基因9个、与脂类代谢相关的候选基因3个,发现五指山猪免疫、代谢和神经功能相关基因的受选择程度强于杜洛克猪,为揭示五指山猪特色性状形成的分子机制提供参考。 相似文献
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辽宁黑猪和荷包猪均为辽宁地方优良品种。本试验通过测定辽宁黑猪、荷包猪的皮脂率、大理石花纹、瘦肉率、眼面最后肋、眼面3～4肋、脂肪率来评定两个品种间的理化指标差异。试验数据表明，辽宁黑猪与荷包猪的生理、生化指标差异显著。辽宁黑猪和荷包猪的皮脂率、大理石花纹、脂肪率差异显著，荷包猪的皮脂率、大理石花纹、脂肪率显著高于辽宁黑猪。辽宁黑猪的瘦肉率高于荷包猪，二者差异显著。辽宁黑猪和荷包猪的眼面最后肋、眼面3-4肋差异显著，辽宁黑猪的眼面最后肋、眼面3-4肋高于荷包猪。可以看出，肉质方面辽宁黑猪要好于荷包猪。 相似文献