调控民猪Tβ4基因转录因子的筛选与分析     

张冬杰  汪亮  刘洋  刘娣 《中国畜牧兽医》2019,(9)

为了筛选调控民猪胸腺β4(Tβ4)基因转录的增强子,探究该基因的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tβ4基因启动子区系列截短片段,与pMD18-T载体连接构建克隆质粒;通过双酶切和连接反应将系列截短片段定向连入pGL3-basic载体构建双荧光素酶重组质粒;将重组质粒转染PK15细胞系,利用双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;根据相对荧光素酶活性的高低进一步筛选Tβ4基因的启动子核心区域;利用3个在线软件预测核心区域内的转录因子结合位点,根据预测结果,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点构建突变载体,在PK15细胞中以野生型载体为对照检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明,试验成功构建了6个Tβ4基因系列截短的启动子片段,其中5个片段具有明显的活性。经过两轮的双荧光素酶活性检测发现,-155～-105 bp区域为民猪Tβ4基因的启动子核心区域,经生物信息学分析发现,该区域存在E2F-1、MYBAS1和ELK-1转录因子的结合位点。利用定点缺失构建了3个转录因子缺失的突变载体,经双荧光素酶检测发现仅有ELK-1结合位点的缺失,会造成启动子活性的显著下降(P0.05)。据此推测ELK-1是民猪Tβ4基因转录的正调控元件。  相似文献   

猪hnRNPUL1基因克隆及变异剪接体鉴定     

宋艳芳  张彩霞  杜芳芳  马骏杰  刘东宇  刘娣  杨秀芹 《畜牧兽医学报》2020,51(3):443-451

旨在克隆民猪hnRNPUL1基因全长编码区（complete coding sequence，CDS）序列并进行可变剪接分析，研究其组织表达和亚细胞定位情况。本研究以3头3月龄民猪为试验材料，利用RT-PCR技术克隆hnRNPUL1基因CDS及可变剪接体，应用qRT-PCR检测其在心、肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、背肌、腿肌等组织中的表达情况，同时，在生物信息学预测的基础上，通过融合表达绿色荧光蛋白的方法鉴定核定位序列。研究结果表明，猪hnRNPUL1基因（GenBank accession No.：MN399154）CDS全长2 580 bp，预期编码的多肽链存在着hnRNPs家族的特征性结构域——SAP、SPRY和AAA；猪hnRNPUL1普遍表达于所检测的各组织中，其中在脾脏中表达量最高，在腿肌中表达量最低；核定位序列（NLS）位于多肽链的133~430 aa处，与生物学信息学预测的结果存在着偏差；同时获得了2个变异剪接体和11种可变剪接片段。本研究结果对进一步揭示猪hnRNPUL1基因功能及转录调控机制提供了基础。  相似文献   

猪ECH1基因部分序列的遗传变异分析     

张冬杰  刘娣  汪亮  王文涛  杨国伟 《黑龙江畜牧兽医》2011,(19)

为了进一步研究烯脂酰辅酶A水解酶1(enoyl CoA hydratase,ECH1)基因的生物学功能,研究采用克隆测序结合PCR-RFLP的方法分析了民猪ECH1基因的部分DNA序列,并对其中的1个点突变进行了3个猪种内的基因型频率和基因频率计算。结果表明:研究所检测的ECH1基因序列与网上已有序列相比存在8个单核苷酸多态性(SNPs)位点,其中有2个造成酶切位点的改变;民猪和大白猪在PCR-RFLP-BamHⅠ位点的A、B基因频率均接近0.5,而长白猪B为优势等位基因。  相似文献   

东北地区养猪史与民猪的发展演化分析     

孙志茹  刘娣 《农业考古》2013,(1):235-238

本文以中国东北地区养猪史为背景,追溯我国优良本土猪种——民猪的产生、演化和发展的历史脉络.主要通过东北地区考古资料分析民猪与野猪的关联,通过文献调研,从养猪数量、养猪品种、猪产品的应用等方面来勾画古代东北地区少数民族的养猪繁荣史,总结近现代民猪品种的形成过程和进一步的杂交应用与品种保护状况.  相似文献   

园林绿化施工管理中存在的问题     

刘娣 《现代园艺》2013,(21):74-75

<正>近年来,随着人们对保护环境、改善环境意识的提高,城市建设进入生态环境建设阶段,绿化成为热门,绿化事业呈现出前所未有的蓬勃之势,广场绿地、景观大道、小游园、花园小区……层出不穷,然而繁荣背后,也暴露诸多问题。1存在的问题1.1绿化建设投资主体多元化,政府主管部门难以掌  相似文献   

鸡大肠杆菌自家苗母源抗体消长规律研究     

贾志江  刘娣琴  尹风琴  杨红梅 《国外畜牧学(猪与禽)》2011,(5):58-58

本试验用某鸡场分离的大肠杆菌制成的铝胶佐剂灭活苗，免疫种鸡后对后裔雏鸡进行大肠杆菌母源抗体检测，并对不同抗体滴度的雏鸡进行功毒诎验。结果表明，后裔雏鸡的母源抗体早期处于较高水平，平均为6．35log2，雏鸡至23日龄时血清仍保持较好的抗体水平，平均值为4.57log2，可以得到百分之百的免疫保护，随着日龄的增长保护性逐渐降低，至30日龄时几乎无免疫保护。  相似文献   

民猪FSHβ-亚基基因的多态性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张冬杰  杨国伟  刘娣 《中国畜牧杂志》2006,42(1):50-51

采用PCR-SSCP方法,对108头民猪的FSHβ-亚基基因的2个基因座位进行了研究。结果表明:FSHβ-亚基基因的这2个基因座位在民猪内都存在AA、AB、BB3种基因型,A、B基因频率之间差异显著。本实验进一步证明了FSHβ-亚基基因在民猪内存在着丰富的多态性。  相似文献   

野猪和家猪MC4R基因的分子扫描及两个变异位点的PCR-RFLP分析     

杨秀芹  关庆芝  王文涛  刘娣 《中国畜牧杂志》2006,42(21):7-8,18

黑素皮质素受体4是在人类肥胖研究中发现的重要调节因子,参与调节动物的体重、采食量和能量稳态。猪MC4R基因第7跨膜结构功能域的一个高度保守区内的错义突变(G→A)与脂肪性状相关显著。本研究对野猪、民猪、大白猪MC4R基因进行克隆测序,寻找新的多态位点;并对其中的HindⅢ和ClaⅠ位点的突变进行了酶切多态性分析,建立了基于限制性内切酶HindⅢ和ClaⅠ的MC4R基因型的PCR-RFLP分子检测方法。  相似文献   

猪链球菌对红霉素耐药性的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

李艳华  姜成刚  蔡雪辉  童光志  刘娣  佟恒敏 《中国预防兽医学报》2006,28(3):359-362

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌，采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌，用双纸片法确定耐药株的耐药表型，通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型，即同时对克林霉素耐药。在3株红霉素耐药株中扩增到ermb基因，其余未能检测到ermb或mefA基因。  相似文献   

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株核衣壳蛋白重组鸡痘病毒的构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

智海东  王云峰  张晶  王玫  刘娣  童光志 《中国预防兽医学报》2007,29(1):1-4,26

从含有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N）的质粒扩增出N基因，构建禽痘病毒转移载体。该载体含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2控制之下的PRRSVN基因、P11启动下的报告基因lacZ以及用于同源重组的禽痘病毒基因组的片段。在转移载体转染亲本病毒S—FPV-017感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）之后，采用蓝色表型筛选的方法，筛选到表达N基因的重组病毒，并对其进行了6轮蚀斑纯化。PCR方法鉴定证明重组病毒的基因组中含有完整PRRSVN基因，间接免疫荧光试验证明了PRRSVN蛋白在重组病毒感染的CEF细胞中获得表达，本研究为猪繁殖与呼吸综合征非复制型疫苗的研制打下了基础。  相似文献