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通过Ni柱亲和层析和G-100层析技术对真核表达蛋白进行纯化,SDS-PAGE分析GPVP32蛋白纯化效果;应用琼脂扩散试验检测纯化蛋白的抗原反应性,并以纯化蛋白作为包被抗原建立间接ELISA方法。结果显示,从真核表达产物中获得了纯化的GPVP32蛋白,琼脂扩散试验显示纯化的GPVP32蛋白具有良好的抗原反应性;基于纯化蛋白建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。结果表明,本试验建立的间接ELISA方法可用于山羊痘流行病学的调查和血清抗体水平的监测,为山羊痘的防控提供了有效技术。 相似文献
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间接ELISA检测鸭疫里氏杆菌抗体的研究 总被引：10，自引：0，他引：10
以提取的血清１型鸭疫里氏杆菌（Ｒ．ａ）Ｊｂ２株的脂多糖作为包被抗原，成功地建立了一种检测１型Ｒ．ａ抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法，特异性试验和重复性试验证明此方法的特异性高等重复性好，并比较了间接ＥＬＩＳＡ方法，间接血凝试验，玻片凝集试验和琼脂扩散试验对抗体检出敏感性，结果表明间接ＥＬＩＳＡ方法最敏感，人工感染后鸭第７２小时即可检出血清抗体为阳性（３／４）其次是间接血凝试验，第９６小时即可检出５０％（２ 相似文献
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为了解贵州省山羊流产与山羊痘的相关性,采用琼脂扩散试验和PCR法对本省10个市(县)流产羊群的血清和病料样本进行山羊痘抗原抗体及病原核酸检测,同时血清进行布氏杆菌抗体检测,流产胎儿病料进行羊流产亲衣原体病原核酸检测。结果发现山羊痘羊群流产率达37.1%(4329/11660),山羊痘血清抗体阳性率为38.2%(34/89),抗原阳性率为72.7%(32/44),流产胎儿山羊痘病毒核酸检出率为83.3%(10/12),发病羊群未检出布氏杆菌和羊流产亲衣原体感染。结果表明,山羊流产与山羊痘感染有一定关系,提示在山羊养殖中应加强饲养管理,防止山羊痘感染引起孕羊流产。 相似文献
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建立了检测血清中禽副粘病毒2型（PMV-2）抗体的间接免疫荧光试验（IFA）、间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）以及斑点酶联免疫吸附试验（Dot—ELISA）方法，并将三种方法同血凝抑制试验（HI）进行了比较。结果表明，建立的IFA、间接ELISA和Dot—ELISA等三种抗体检测方法其敏感性、特异性均很好，与HI方法相比，敏感性也大大增强。 相似文献
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用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血凝诊断试剂的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
用弓形虫代谢分泌抗原(E／SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂，进行人和动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明，在弓形虫阴性、阳性血清检测中，弓形虫E／SA间接血凝诊断试剂与弓形虫虫体抗原间接血凝诊断试剂的符合率为100％；在人工感染兔血的检测中，E／SA致敏的间接血凝诊断试剂比虫体抗原致敏的间接血凝诊断试剂的阳性检出时间提前2d，显示弓形虫E／SA间接血凝诊断试剂具有早期诊断和生前诊断的应用价值。 相似文献
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山羊痘病毒(GTPV)G9是一种膜蛋白,是潜在的优势抗原,为建立检测山羊痘的间接ELISA方法,本研究克隆GTPV G9基因并原核表达了重组G9蛋白,利用该蛋白作为包被抗原,经各反应条件优化建立了检测GTPV抗体的间接ELISA方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估.结果显示,原核表达的重组G9蛋白约为39... 相似文献
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本试验利用气管环组织培养中和试验和间接血凝试验检测鸡清中传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗体，同此确定７株ＩＢＶ之间的抗原交叉范围，从而比较两种检测方法之间的相关性，结果表明，在间接血凝血试验中７株ＩＢＶ之间的抗原相关性Ｒ值介于３．１３～１００之间，而气管环组织培养中和试验Ｒ值介于０．７８～１００之间，中和试验Ｒ值变化范围较血凝试验宽得多，两种检测方法相关关系Ｒ可达０．８５３。 相似文献
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羊痘病毒 总被引：6，自引：0，他引：6
羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病.作者着重综述山羊痘和绵羊痘.羊痘病毒的基因组较大,山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组非常相似,但自然条件下一般不会发生交叉感染.临床症状主要以发热和全身性丘疹或结节为特征,结合其临床症状实验室用透射电子显微镜检测病毒粒子的典型形态即可做出快速诊断.病毒培养和分离虽有较高的特异性,但耗时长;因羊痘病毒和副痘病毒有相似的血清型,一些血清学的诊断方法如琼脂扩散试验(AGID)、间接免疫荧光试验、检测抗体的ELISA等,因会出现抗体交叉反应而无法区分这2种病毒的感染;又因羊痘感染后主要引起细胞介导免疫,动物接触病原后仅产生低水平的中和抗体,故而病毒中和试验敏感性也不高.近年来,用于ELISA检测抗原的方法已经建立,具有较高的特异性;Western印迹试验利用羊痘病毒的P32抗原与待检血清反应,具有较好的敏感性和特异性,但价格昂贵、操作难.PCR可用来检查活体或组织培养品中羊痘病毒基因组;在此基础上发展了多重PCR技术,不但敏感性和特异性更强,且大量节省了时间和精力.治疗羊痘病毒无特效药,做好疫苗接种等防制措施很关键;目前采用活疫苗和灭活疫苗来控制本病,所有被鉴定的羊痘病毒毒株都有一个相同的主要中和位点,可以交叉保护.灭活苗的免疫保护期短.以羊痘病毒基因组作为其他反刍动物病原基因的载体,生产新一代羊痘病毒基因工程疫苗,具很大潜力. 相似文献
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Bhaskar Sharma B. S. Negi A. B. Pandey S. K. Bandyopadhyay H. Shankar M. P. Yadav 《Tropical animal health and production》1988,20(2):109-113
Summary The counterimmunoelectrophoresis (CIE) test was standardised for the detection of goat pox antigen and antibody using inactivated antigens. The chloroform inactivated and live antigens were equally sensitive for detection of goat pox precipitins. The precipitinogens of goat pox virus (GPV) were found to be soluble in nature. The CIE test was quick as well as more sensitive than the agar gel precipitation test for detection of GPV antibody/antigen. The CIE employing inactivated antigen has been used for the first time in the detection of GPV antibodies/antigens.
Deteccion Del Antigeno Y Anticuerpos De Viruela Caprina Mediate La Prueba De Contrainmunoelectroforesis
Resumen Se estandarizó la prueba de contrainmunoelectroforesis, para la detección del antígeno y anticuerpos del virus de la viruela caprina, usando antígenos inactivados. El antígeno inactivado con cloroformo y el antígeno vivo, fueron igualmente sensitivos para la detección de precipitinas de viruela caprina. Los precipitógenos del virus de la viruela caprina se encontraron que eran solubles. La prueba de contrainmunoelectroforesis fue más rápida y más sensitiva que la precipitación agar gelatina para la detección de anticuerpos/antígenos del virus de la viruela caprina. La prueba de contrainmunoelectroforesis con antígeno inactivado ha sido utilizada por vez primera en la detección de anticuerpos/antígenos del virus de la viruela caprina.
Detection De l'Antigene Et De l'Anticorps Variole Caprine Par Un Test De Contrimmuno-Electrophorese
Résumé Le test de contrimmuno-électrophorèse (CIE) a été standardisé pour la détection de l'antigène et de l'anticorps variole caprine avec des antigènes inactivés. Les antigènes vivants et inactivés par le chloroforme sont de sensibilité équivalente pour la détection des précipitines variole caprine. On a montré que ces précipitogènes du virus variole caprine (VVC) étaient de nature soluble. Le CIE est rapide et plus sensible que le test de précipitation en gélose pour la détection des antigènes et anticorps VVC. C'est la première fois que le CIE mettant en oeuvre un antigène inactivé a été utilisé.相似文献
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为了研究重组羊白细胞介素(gIL)-18在酵母系统中的高效表达,进一步阐明该重组蛋白的生物学活性,以含有gIL-18基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,构建重组表达质粒pPICZ-gIL-18,转化于毕赤酵母GSll5,以甲醇诱导表达,经sDS-PAGE和western blot分析证实了重组蛋白的表达,分泌的重组gIL-18表达量为100 mg/L.经纯化后用MTT法和MDBK-VSV法检测表达的重组IL-18体外生物活性,利用免疫试验检测了重组蛋白对羊痘疫苗的免疫增强作用.实验结果表明,该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性,比活性为1.5×105 u/mg.体外具有增强羊痘疫苗的活性.毕赤酵母分泌表达的重组gIL-18具有良好的生物学活性,为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的大规模应用奠定了基础. 相似文献
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山羊痘病毒的分离与鉴定 总被引：5，自引：0，他引：5
对贵州省2002年以来发生的疑似山羊痘病例样品进行了病毒的分离与鉴定。取山羊痘病羊的皮肤痘疹和水疱作待检病料,接种BHK-21传代细胞盲传3代后,出现了明显的、规律的细胞病变(CPE),病毒细胞培养物在F4代以后,能与山羊痘标准阳性血清在琼脂扩散试验中出现白色沉淀线,而与正常细胞的培养物及PBS不出现沉淀线;参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列,设计了1对特异性引物,对现场分离毒株进行PCR扩增,可扩增出963bp特异性的DNA条带。用待检病料感染的BHK-21细胞培养物接种9日龄鸡胚绒毛尿囊膜,随着传代次数的增加,痘斑病变的出现率从13.3%～20%上升至33.3%～40%;用山羊痘病变皮肤、鸡胚绒毛尿囊膜和感染细胞进行超薄切片,在电子显微镜下可以观察到典型的山羊痘病毒粒子。 相似文献
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山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPV p32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti).表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性.以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法.该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%.上述结果表明.该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体.本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测. 相似文献
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以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料,感染Vero细胞,通过台盼蓝、吖啶橙/溴乙锭荧光染色分析细胞的死亡及凋亡比例;经特异性PCR从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因,基因长531bp,含有完整的编码框,与绵羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的相似性为97%,因此确定为山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因。进一步研究山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因在Vero细胞中的表达,结果显示,病毒感染Vero细胞24h时没有检测到凋亡现象,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的mRNA水平最高;感染48h时,Vero细胞的凋亡率上升到13%,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量随之下降。结果表明,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量与Vero细胞的凋亡呈负相关,有助于病毒在细胞内的生存和侵染等过程。 相似文献