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猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究 总被引：17，自引：2，他引：17
用PCR方法配合生化鉴定，从有肺炎症状猪的肺脏及进行性萎缩性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)症状猪的鼻拭子中分离出66株多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida，Pm)。然后做了药敏试验，并用PCR方法对这66株Pm进行分型及毒素基因的检测，用豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对产毒素多杀性巴氏杆菌(Toxigenie Pasteurella multocida，T^ Pm)进一步鉴定。结果显示PCR鉴定与生化鉴定Pm结果完全一致；PCR分型表明有46株为D型Pm，18株为A型：Pm，1株为B型Pm，1株无法定型；有8株用PcR检测为T^ Pm；豚鼠皮肤坏死试验及小鼠致死试验对这8株T^ Pm的进一步鉴定也表明均为产毒素菌株。所鉴定的8株T^ Pm都为D型，都分离于有严重PAR症状的猪。 相似文献
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从187头猪共采集309个样本作研究。其中77头为屠宰猪,25头为死猪,22头根据症状和肉眼病变认为巴氏杆菌病。50头猪(26.73%)巴氏杆菌阳性。共分离到52株(82.54%)多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和11株(17.46%)溶血性巴氏杆菌(P.haemolytica,Ph)。Pm主要从肺,其次从鼻拭中分离到,而Ph只有从肺,其次是鼻拭中分离到。在52株Pm中,26株(50%)属血清A型,10株(19.23%)属血清B型,而16株(30.76%)不能定型。11株Ph均不能定型。Pm株对头孢氨苄(cephalexin)100%敏感,其次为诺氟沙星(nor-floxacin)96.15%和庆大霉素(gentamicin)88.46%,林可霉… 相似文献
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为了解2017年我国猪源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida, Pm）的流行情况及其耐药情况，利用细菌分离培养和PCR方法分离鉴定Pm，对其荚膜血清型、地区分布和感染方式进行调查，并采用纸片法测定分离株对20种抗菌药物的敏感性。结果显示，从全国6288份临床病料中分离并鉴定出236株Pm，总分离率为3.75%。随机选取55株进行血清型分型，其中A型25株，D型27株，F型1株，未定型2株；分离率最高的省份为广东省（4.97%），其次是河南省（3.69%）和湖北省（3.25%）；感染模式中，Pm单纯感染占比42.80%，混合感染占比57.2%，最常与链球菌和副猪嗜血杆菌共感染，比例分别为28.81%和12.29%。耐药性试验显示，Pm对强力霉素的耐药率高达83.64%，对卡那霉素、庆大霉素、链霉素和阿米卡星等氨基糖苷类药物的耐药率为43.64%～52.73%，对多粘菌素B和氧氟沙星最敏感（耐药率均为1.82%）。本研究表明我国猪群中Pm流行的主要血清型仍然是A型和D型，临床上Pm与其他细菌发生混合感染的情况普遍存在，并且对多种抗生素产生了耐药性。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2020,(6)
为确定新疆北疆部分地区疑似病例中分离的牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)流行的血清型、ST型及毒力相关基因的分布情况,本研究以分离的17株牛源Pm为研究对象,采用荚膜多重PCR分型法、脂多糖多重PCR分型法(LPS-mPCR)、多位点序列分型法(MLST)及PCR方法检测17株Pm分离株的荚膜型、脂多糖型、MLST型及7类共25个毒力相关基因的分布情况。结果显示,13株Pm的荚膜脂多糖型为A∶L3型,ST型均为ST1型,4株Pm荚膜脂多糖型为B∶L2型,ST型均为ST44;17株Pm毒力相关基因(exbB、exbD、fimA、fur、hgbA、hsf2、nanB、oma87、ompA、ompH、plpB、psl、ptfA、sodA、sodC、tonB和tbpA)的检出率高达100%,toxA基因的检出率为0。结果表明,从新疆北疆部分地区规模化牛场疑似病例中分离的Pm主要血清型为A∶L3∶ST1型。 相似文献
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牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定 总被引：2，自引：2，他引：0
为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖(LPS)含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14d血清抗体达1∶64~1∶128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。 相似文献
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为建立副猪嗜血杆菌(Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pm)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于Hps的Omp P2基因,Pm的PlpE基因设计两对特异性引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种同时检测Hps及Pm的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性地检测Hps和Pm,其对重组质粒标准品的最低检测浓度分别为5.60×10^2拷贝/μL、7.58×10^2拷贝/μL。双重与单一荧光定量PCR最低检测限相同,且均是常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于2.5%。临床应用结果显示:该方法对阳性样品的检出率为53.57%,明显优于常规PCR和细菌分离鉴定。该方法能够用于两种疾病的同时检测和快速排查疾病。为两种疾病的防治提供有效检测工具。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2020,(7)
为研究牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)Oma87基因的分子特征及同源性,本研究对荚膜血清A型(capsular serotype A,Pm8)Oma87基因进行扩增、克隆和测序,利用在线软件对其进行分子特征、抗原性及遗传进化分析。结果显示,Oma87基因全长为2 376 bp,编码791个氨基酸;氨基酸序列分析发现,该蛋白为酸性的亲水性蛋白,稳定性高,具有信号肽结构但不存在跨膜区域;二、三级结构分析发现,该蛋白为无规则卷曲及多段延伸链所形成的"N"字型三维立体结构。遗传进化分析显示,新疆分离株Pm8 Oma87基因与其他不同地域的牛源A型Pm和部分猪源A型Pm的同源性较近,与其他型Pm的同源性较远;通过VaxiJen软件分析发现,Oma87蛋白的保护性抗原的总体预测值为0.5478,高于正常阈值0.4,证明Oma87蛋白可作为免疫原性蛋白,为进一步研究Oma87蛋白奠定了理论基础。 相似文献
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猪多杀性巴氏杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立猪多杀性巴氏杆菌(Pm)的快速检测方法,本研究以Pm的PlpB基因序列为靶基因设计特异性引物,建立了Pm特异性的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法.经反应条件优化,确定反应条件为63℃,20 min.检测结果显示,建立的LAMP检测方法具有良好的特异性,灵敏度为25 cfu/mL;与大肠杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、沙门氏菌无任何交叉反应.采用建立的LAMP方法与常规PCR方法对临床54份分离样品进行检测,检测结果为31份为阳性,23份为阴性,二者符合率为100％.该方法的建立为Pm在临床上的快速检测提供了一种新的技术手段. 相似文献
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牛源多杀性巴氏杆菌血清分型及毒力相关基因的检测研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为确定新疆北疆部分地区疑似病例中分离的牛源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）流行的血清型、ST型及毒力相关基因的分布情况,本研究以分离的17株牛源Pm为研究对象,采用荚膜多重PCR分型法、脂多糖多重PCR分型法（LPS-mPCR）、多位点序列分型法（MLST）及PCR方法检测17株Pm分离株的荚膜型、脂多糖型、MLST型及7类共25个毒力相关基因的分布情况。结果显示,13株Pm的荚膜脂多糖型为A：L3型,ST型均为ST1型,4株Pm荚膜脂多糖型为B：L2型,ST型均为ST44;17株Pm毒力相关基因（exbB、exbD、fimA、fur、hgbA、hsf2、nanB、oma87、ompA、ompH、plpB、psl、ptfA、sodA、sodC、tonB和tbpA）的检出率高达100%,toxA基因的检出率为0。结果表明,从新疆北疆部分地区规模化牛场疑似病例中分离的Pm主要血清型为A：L3：ST1型。 相似文献
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联合检测兔巴氏杆菌和波氏杆菌病血清抗体的Dot-ELISA方法研究 总被引：2，自引：0，他引：2
兔多杀性巴氏杆菌病(Pm)和兔支气管败血波氏杆菌病(Bb)是家兔的两种主要细菌性传染病。兔波氏杆菌病可引起家兔的慢性鼻炎,兔巴氏杆菌病也可引起包括呼吸道在内的多种疾病。试验旨在建立一种简便、快速、经济、准确的联合检测Pm和Bb抗体水平的方法,可用于这两种疾病的免疫监测及流行病学调查。1材料1.1菌种兔巴氏杆菌Pm90株、兔支气管败血波氏杆菌Bb82株,为山东省农业科学院畜牧兽医研究所分离保存[1]。1.2血清大肠杆菌多因子血清、沙门菌多因子血清,购自中国兽药监察所;魏氏梭菌、兔瘟、Pm和Bb阳性血清,山东省农业科学院畜牧兽医研究所… 相似文献
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为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）灭活疫苗菌株，本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株，测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖（LPS）含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价，并进行了攻毒保护试验。结果显示，分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多，均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因；免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应，在二免后14 d血清抗体达1：64~1：128，强毒攻毒后全部存活，而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明，Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株，其中Pm3作为首选株。 相似文献
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为研究牛源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）Oma87基因的分子特征及同源性，本研究对荚膜血清A型（capsular serotype A，Pm8）Oma87基因进行扩增、克隆和测序，利用在线软件对其进行分子特征、抗原性及遗传进化分析。结果显示，Oma87基因全长为2 376 bp，编码791个氨基酸；氨基酸序列分析发现，该蛋白为酸性的亲水性蛋白，稳定性高，具有信号肽结构但不存在跨膜区域；二、三级结构分析发现，该蛋白为无规则卷曲及多段延伸链所形成的"N"字型三维立体结构。遗传进化分析显示，新疆分离株Pm8 Oma87基因与其他不同地域的牛源A型Pm和部分猪源A型Pm的同源性较近，与其他型Pm的同源性较远；通过VaxiJen软件分析发现，Oma87蛋白的保护性抗原的总体预测值为0.5478，高于正常阈值0.4，证明Oma87蛋白可作为免疫原性蛋白，为进一步研究Oma87蛋白奠定了理论基础。 相似文献
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产毒多杀性巴氏杆菌研究进展 总被引：4，自引：1，他引：3
产毒多杀性巴氏杆菌 (T Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DNA的合成及分裂。基于此毒素的特性 ,已经建立了诸如豚鼠皮肤坏死实验、小鼠致死实验、细胞促生长实验、胎牛肺细胞毒性实验、EL ISA及 PCR等方法来检测产毒多杀性巴氏杆菌。随着人们对产毒多杀性巴氏杆菌毒素活性的研究 ,猪传染性萎缩性鼻炎的疫苗也逐渐向更安全、有效的毒素疫苗发展。文章主要对 T Pm的检测方法、毒素生物学活性及疫苗的发展进行了概述 相似文献
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对17株分离自猪萎缩性鼻炎临床症状猪群的多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),进行了生物学特性试验与ToxA基因鉴定。基于Pm对甘露醇、卫茅醇、山梨醇、海藻糖的发酵能力和产生鸟氨酸脱羧酶的特性,鉴定出10株Pm多杀亚种(P.multocidasubsp.multocida);7株Pm败血亚种(P.multocidasubsp.septica)。根据PCR荚膜分型结果,有8株A型,9株D型。针对ToxA基因中的1 230 bp片段,采用T1/T4引物,4株Pm分离菌株被确定为产毒多杀性巴氏杆菌(ToxingenicP.multocida,T+Pm),占23.53%(4/17)。同时对17株Pm分离株进行药物抗性测定和分析得知,17株Pm对青霉素、先锋霉素Ⅴ、卡那霉素、庆大霉素、丙氟哌酸、氟哌酸、多黏菌素B和利福平的敏感率均在52.9%~100%,而对链霉素和氯洁霉素均不太敏感。 相似文献
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鲍娟 《上海畜牧兽医通讯》2013,(1):7-9
本试验基于T＋Pm产生皮肤坏死毒素的生物学活性，采用豚鼠皮肤坏死试验检测Pm分离物所产毒素的特征并进行病理组织学观察；针对猪萎缩性鼻炎Pm菌株的toxA基因选择不同引物，鉴别T＋Pm与T—Pm分离物。针对ToxA基因中的1230bp片段，将分离自有萎缩性鼻炎临床症状猪群的17株多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocida，Pro）进行PCR扩增，其中4株Pm分离菌株确定为产毒多杀性巴氏杆菌（ToxingenicPasteurellamultoci da，T＋Pm），占23．53％（4／17）。本试验丰富了猪源多杀性巴氏杆菌的基因资源，在猪萎缩性鼻炎的诊断、防制和净化上具有应用价值。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2015,(11)
为筛选牛源多杀性巴氏杆菌(Pm)交叉保护性抗原,本研究以A型Pm CQ2株基因组为模板,对其omp A、omp H、plp E、pm0979、P6和pfh B基因分别进行扩增,克隆于相应表达载体并进行原核表达,同时对表达产物进行纯化及western blot鉴定。将纯化的重组蛋白免疫小鼠,分别测定其对2 LD50剂量的A型和B型Pm的攻毒保护效果。结果表明,重组蛋白r Omp A、r Omp H、r Plp E、r Pm0979、r P6和r Pfh B对A型Pm CQ2株的攻毒保护率分别为20%、60%、70%、40%、20%和10%,对B型Pm CVCC450株的攻毒保护率分别为0、30%、40%、20%、10%和0,表明重组蛋白r Plp E、r Omp H和r Pm0979可以针对不同血清型的Pm提供较好的交叉保护作用。本研究为牛源Pm新型疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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应用间接ELISA检查104例多杀巴氏杆菌(Pm)人工感染兔的血清,100/104为阳性反应,检出率96.2％。分别对30例波氏支气管败血菌、8例金黄色葡萄球菌、14例病毒性出血症病毒人工感染兔及50例健康兔的血清进行检查,均呈阴性反应。阻断试验证明本方法具有特异性。用A型荚膜Pm抗原分别对A型或D型Pm人工感染的61只、43只兔进行ELISA,未见型特异性。Pm人工感染兔在接种后15～20天血清抗体阳转,抗体存留期在6个月以上。 相似文献
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为了研究青藏高原犬源多杀性巴氏杆菌(Pm)的KMT1基因与其他菌株的分子进化关系,试验采用PCR方法扩增了1株犬源Pm分离株P1202的种特异性KMT1基因,然后将获得的460 bp的目的基因片段连接到pMD18-T载体上,进行Pm KMT1基因的克隆及序列分析。结果表明:分离株KMT1基因编码区核苷酸序列与GenBank中发表的12株国内外Pm分离株的KMT1基因序列同源性为39%~72%。P1202株与FJ986389序列的同源性最高,为72%,说明二者进化途径较近,而与AY225344、AY225345、AY225346、AY225347序列的同源性较低,说明它们之间进化途径较远。 相似文献