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探讨程序化冷冻与玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎的复苏率及其发育潜能的影响。通过小鼠的卵母细胞与早期胚胎的不同冷冻方法的比较,为后续阿旺绵羊的胚胎冷冻保存提供参考。采用程序化冷冻与玻璃化冷冻技术,分别冷冻小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎,复苏后培养,比较不同冷冻处理后的复苏率、成熟率与囊胚率。小鼠GV期卵母细胞程序化冷冻复苏率(48.00%±5.29%)显著低于玻璃化冷冻复苏率(65.00%±5.00%),有统计学差异(P=0.0147<0.05);而程序化冷冻后复苏卵母细胞的发育成熟率略高于玻璃化冷冻组,但无统计学意义。小鼠二细胞期胚胎程序化冷冻组复苏率(76.00%±2.00%)显著高于玻璃化冷冻组复苏率(70.00%±2.00%),有统计学差异(P=0.0213<0.05);冷冻后复苏胚胎发育的囊胚率程序化冷冻略低于玻璃化冷冻及对照组,但无统计学意义。 相似文献
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牛胚胎冷冻保存,是胚胎移植实践中不可缺少的技术。试验人员自1981年后用程序冷冻机对牛胚胎进行了初步试验。材料及方法:①供试胚胎:所用18个胚胎(后期桑椹胚——囊胚期的胚胎),都是由超排处理和人工授精的供体牛上于第7天(排卵日为第1天)非手术收集的;②冷冻液:在林格氏液和非活化血清的2:1的液体内加青霉素800U/ml,再逐步加入甘油1.0M作为冷冻液,使胚胎在冷冻液中平衡60分钟;③冷冻方法:把胚胎放入装冷冻精液用的0.5ml管内,用程序冷冻机(第三代,FFP_(190))冷冻,该程序 相似文献
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本研究采用不同来源的体外生产胚胎(屠宰场卵巢IVF胚胎,OPU-IVF胚胎,SCNT胚胎),系统研究了不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的影响,以完善水牛体外生产胚胎冷冻方法,进一步提高胚胎冷冻效果。试验选用6～7日龄囊胚分别用不同的冷冻液和不同冷冻方法进行胚胎冷冻。玻璃化冷冻液分别为40%EG、25%EG+25%DMSO和20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖;程序化冷冻液分别为10%甘油和0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA。结果表明:(1)在玻璃化冷冻中,无论何种胚胎不同冷冻液的冷冻效果有明显的差异,但均以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液的冷冻效果最好,并且高于程序化冷冻的存活率;而对于程序化冷冻,用10%甘油作为冷冻液,屠宰场卵巢IVF胚胎的冷冻后存活率略高于用0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA的冷冻后存活率,但差异不显著(P>0.05)。(2)VF胚胎利用程序化冷冻胚胎解冻后,在0～24 h内有76.5%胚胎复活,高于玻璃化冷冻的复苏率(48.9%)(P<0.05);而与此相反,在24～48 h内,玻璃化冷冻胚胎的复苏率(42.6%)则高于程序化冷冻(23.5%)(P<0.05)。综上所述,各种来源的水牛体外生产胚胎均可进行冷冻保存,应用玻璃化冷冻的效果好于程序化冷冻,且以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液进行玻璃化冷冻效果最好,但程序化冷冻后的胚胎复苏速度明显快于玻璃化冷冻的速度。 相似文献
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《中国家禽》2006,28(19):102-102
目的：研究鸡胚胎原始生殖细胞（EPGCs）对不同冷冻体系的适合性。方法：对发育至第19期和第28期胚胎性腺PGCs，采用二甲基亚砜（DMSO）、乙二醇、聚乙二醇为冷冻保护液，在不同组合、不同浓度、不同的冷冻程序下进行超低温冷冻保存。结果：①采用同一种冷冻保护液，10%浓度与15％浓度之间，除DMSO＋乙二醇（冷冻保护液Ⅳ）外，其他类型的冷冻液对EPGCs保存后存活率的影响差异不显著（P〉0．05）；20%浓度的各种冷冻保护液对EPGCs保存后的存活率最低，且与10%和15％浓度相比差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）；②采用同一种冷冻保护液，浓度为10%时， 相似文献
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为探究开放式拉长细管(OPS)玻璃化冷冻对四倍体胚胎发育的影响,本实验利用2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,再对四倍体胚胎进行OPS玻璃化冷冻,分别观察记录二倍体胚胎、四倍体胚胎以及冷冻解冻后四倍体胚胎的发育情况。结果表明:2-细胞胚胎电融合效率为96.1%;二倍体胚胎组与电融合后四倍体胚胎组的囊胚率和孵化囊胚率差异不显著;冷冻解冻后四倍体胚胎的囊胚率(100%)与四倍体新鲜组(93.3%)差异不显著,其孵化囊胚率(72.3%)较新鲜组(64.9%)显著增高(P<0.05);四倍体冷冻解冻组的囊胚细胞数(31.96)与新鲜组(32.54)无显著差异;冷冻解冻后的四倍体早期囊胚进行体外培养时其发育速度比对照组更快。可见,冷冻对小鼠四倍体胚胎的囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响,但孵化囊胚率显著提高,且OPS玻璃化冷冻后使四倍体胚胎的发育速度更快。 相似文献
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为了比较冷冻叶片(Cryoleaf)、冷冻帽(Cryotop)、自制半麦管(hemi-straw)三种冷冻载体的冻存效果,试验采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠8-cell胚胎。结果表明,Cryoleaf组、Cryotop组和hemi-straw组胚胎复苏率分别为92.3%、89.2%和86.2%,三组比较差异不显著(P0.05)。Cryoleaf组、Cryotop组及hemi-straw组胚胎的囊胚形成率分别是95.0%、91.4%和80.4%,三组比较差异显著(P0.05);新鲜对照组囊胚形成率为98.5%,与Cryoleaf组、Cryotop组分别比较差异不显著(P0.05),与自制hemi-straw组比较差异显著(P0.05)。结论:采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠8-cell期胚胎,使用Cryotop和Cryoleaf作为冷冻载体,可以获得更高的复苏率和囊胚率,优于自制hemi-straw,可以很好地用来冻存人类的胚胎。 相似文献
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为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM 期(18、24 h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养.GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37％、23.17％、33.07％)均极显著低于对照组(82.96％,P＜0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P＜0.01).本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P＜0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P＜0.01).结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响. 相似文献
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《中国畜牧杂志》2016,(9)
为探究不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响,使用胚胎冷冻仪分步冷冻,比较不同步骤中不同冷冻速率冷冻后,细胞二乙酸荧光素(FDA)染色活率(简称活率)和培养24 h后细胞贴壁率(简称贴壁率)。结果表明:第1步冷冻,-0.7℃/min组活率最高(0.846),但与-0.5℃和~1℃/min组差异不显著(P0.05)。-1℃/min组贴壁率最高(59.1%),且与各组间差异均极显著(P0.01)。第2步冷冻,投入液氮前不同温度,-75℃组活率最高(0.530),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P0.05);-35℃组贴壁率最高(36.6%),且与各组间差异极显著(P0.01)。因此,鸡BCs使用胚胎冷冻仪进行分步冷冻,以-1℃/min的速率降温至-7℃保持10 min,继续以同样速率降温至-35℃投入液氮保存,解冻后不仅可以获得较好的活率,而且培养后可以获得较高的贴壁率。 相似文献
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1 直接移植冷冻的绵羊胚胎获得成功应用简单的胚胎冷冻方法 ,并将解冻的胚胎直接移植有助于降低绵羊胚胎移植的成本 ,加速绵羊品种改良。本实验是要研究胚胎冷冻方法在现场应用的可行性。所用的胚胎都从经ＦＳＨ -处理的情期第 7ｄ供体母羊收集 ,并对胚胎进行形态鉴定 ,用改良的ＰＢＳ清洗 ,于 10 %的甘油 ,10 %甘油和 2 0 %乙二醇中分别培养 5ｍｉｎ ,然后移入冷冻液 (2 5 %的甘油和 2 5 %的乙二醇 )中 ,装管 ,并将其移入液氮中冷冻保存。解冻的胚胎或直接移植或按常规方法处理后移植。结果表明 ,冷冻胚胎和新鲜胚胎的妊娠率和存活率没有… 相似文献
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采用Ficoll密度梯度离心,提取第 19期(孵化 72h)性腺中的PGCs,对其应用不同的冷冻保护液和不同的平衡方法进行冷冻保存,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCS用台盼蓝染色检测其存活率,结果发现:从第 19期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下,采用不同的平衡方法进行冷冻,对PGCs的存活率有显著影响(P<0.05)或极显著影响(P<0.01);平衡方法相同,在不同冷冻保护液之间存在显著(P<0.05)或极显著 (P<0.01)差异。PGCs经体外培养 24h后再进行冷冻保存,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极显著(P<0.01)短于分离后直接冷冻的PGCs。 相似文献
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将哺乳类动物的胚胎冷冻保存在液氮中的试验已经在一些动物成功,如小鼠(Whit-tingham等,1972),牛(Wilmut和Rowson,1973)、绵羊(Willadsen等,1976)、山羊(Bilton和Moor,1976)和马(Yamamoto等,1982)。牛的冷冻胚胎已经商业化生产。然而,猪胚胎的冷冻和解冻还未获得成功。据报道,猪的胚胎对于低温,即使是+10℃(Wil-mut,1972;Niemann,1985)都极敏感。本研究是检验由桑葚胚到孵出期囊胚各胚龄猪胚胎冷冻-解冻后能否存活。采用有性周期的8～24个月龄、体重120～ 相似文献
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实验比较不同发育天数所得的早期囊胚和扩张囊胚的冷冻效果,以期找出冷冻前胚胎最佳发育时期及囊胚类型。以猪孤雌激活胚胎为材料,分别取培养到第5、6、7天所得的早期囊胚(EB)和扩张囊胚(B)进行玻璃化冷冻保存,解冻后对其复苏率和内细胞团数损伤进行观察和统计。结果表明:发育第5天所获早期囊胚和扩张囊胚复苏率(32.26%、44.78%)好于第6天(22.45%、35.09%)和第7天(8.33%、32.65%),各发育天数所获扩张囊胚复苏率差异不显著(P>0.05),发育至第5天和6天的早期囊胚复苏率显著高于第7天(P<0.05);在内细胞团损伤比例上,虽各组差异不显著(P>0.05),但第5天和第6天组损伤低于第7天组。结果提示,在孤雌激活后第5天选取扩张囊胚进行冷冻,解冻后所得冷冻效果好。 相似文献
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以MII期卵母细胞作为试验材料,应用玻璃化冷冻方法,就目前应用最多的7组冷冻保护液配方进行筛选,并且比较3种不同冷冻载体冷冻卵母细胞的效果。结果发现:7组冷冻保护液对MII期卵母细胞有低毒性作用,各组分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均低于对照组;综合各组指标,选取3组对猪MII期卵母细胞的发育能力损伤最小的冷冻保护剂,应用GMP管对其冷冻保护效果进行比较,发现第7组冷冻保护液配方EFS不适于MII期卵母细胞的冷冻,其形态正常率、分裂率分别为1.19%、0,与第3组、第6组形态正常率、分裂率(59.48%、53.55%;24.19%、35.02%)差异显著(P0.05)。综合考虑,选取HM+7.5%(DMSO+EG),HM+17%(DMSO+EG)+0.4 mol/L Su作为冷冻保护剂来比较3种不同冷冻载体冷冻卵母细胞的效果差异,发现半麦管冻融后MII期卵母细胞的分裂率高达53.67%,与OPS法的29.33%及GMP法的35.00%相比差异显著(P0.05),半麦管法更适合MII期猪卵母细胞的玻璃化冷冻。 相似文献
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探讨了胚胎分割前后冷冻和不同时期的冷冻胚胎对水牛胚胎分割效果的影响。结果:冷冻后分割组的分割成功率与分割后冷冻组差异不显著(71.39%vs 71.43%,P>0.05),但囊胚冷冻后分割组的半胚发育率显著高于分割后冷冻组(58.33%vs 47.14%,P<0.05);扩张囊胚的冷冻存活率显著高于孵化囊胚(94.84%vs 79.01,P<0.05),但囊胚与孵化囊胚差异不显著(92.67%vs 79.01%,P>0.05),囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚冷冻胚胎的分割成功率(70.76%,73.22%,70.92%)及半胚发育率差异均不显著(53.07%,51.49%,57.99%)(P>0.05)。上述结果说明,水牛囊胚冷冻后分割比分割后冷冻能获得更高的半胚发育率;水牛未扩张囊胚和扩张囊胚的冷冻存活率比孵化囊胚高,且这3个时期的冷冻胚胎均适合分割。 相似文献
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为了获得最适的冷冻猪GV期卵母细胞的冷冻保护液配方和最适冷冻载体,本研究就目前应用最多的7种冷冻保护液配方进行筛选,并且比较3种不同冷冻载体冷冻卵母细胞的效果差异。结果表明:7组冷冻保护液对GV期卵母细胞有低毒性作用,各组分裂率、囊胚率、囊胚细胞数均低于对照组,综合各组指标选取3组对猪MII期卵母细胞的发育能力损伤最小的冷冻保护剂,应用GMP管对其冷冻保护效果进行比较,发现第6组的极体率29.47%,第5组的极体率23.54%与第3组的极体率8.28%相比差异显著(P0.05),且第5组的存活率、极体率与第3组相比差异显著(P0.05)。综合考虑,选取第5组HM+7.5%(DMSO+EG),HM+15%(DMSO+EG)+0.5 mol/L Su组作为冷冻保护液来比较3种不同冷冻裁体冷冻卵母细胞的效果差异,发现半麦管冻融后的卵母细胞存活率高达54.11%与OPS管、GMP管的33.11%和26.79%差异显著(P0.05),半麦管法更适合GV期猪卵母细胞的玻璃化冷冻。 相似文献