牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因的克隆表达及其重组蛋白免疫原性     

简子健  袁江玲  马素贞  黄家雨  沈炯玉 《中国兽医学报》2009,29(10)

本试验将新疆株牛巴贝斯虫的MSA-2c基因克隆,并构建重组质粒pGEX-4T-2/MSA-2c.利用大肠杆菌原核表达系统进行外源蛋白的表达,并成功诱导出GST-MSA-2c融合蛋白.通过优化诱导条件,得到了较高的可溶性表达;利用亲和层析技术纯化后的重组蛋白皮下免疫试验小鼠.间接ELISA检测发现,免疫接种56 d后,抗重组蛋白的抗体效价达到1∶220 000以上.用获得的抗血清进行Western-blot试验,可获得清晰的免疫反应条带.结果表明,本试验所表达的MSA-2c蛋白与文献报道的目的蛋白相符,并具有免疫原性.同时本试验也为建立以MSA-2c重组蛋白作为抗原的血清学诊断体系奠定了基础.  相似文献   

牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学诊断方法的建立     

简子健  马素贞  袁江玲  沈炯玉  吕伟  孙其喆  苗中秋 《新疆农业科学》2011,48(1):139-142

[目的与方法]在优化表达牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白和建立ELISA反应条件的基础上,进-步探讨牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白及其所建立的ELISA检测方法的特异性,从而建立牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法.[结果]牛巴贝斯虫GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA检测方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与牛巴贝斯虫巢式PCR检测方法的阳性符合率为96;.[结论]所建立的GST-MSA-2c融合蛋白间接ELISA血清学检测方法重复性好、特异性强、灵敏度高.这是国内首次利用重组蛋白抗原建立的牛巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段.  相似文献   

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

黄家雨  马素贞  苗中秋  袁江玲  苏贵成  沈炯玉  张兰江  李晓军  简子健 《新疆农业大学学报》2008,31(4)

采用PCR技术,从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tams1基因,该基因长度为846 bp,编码281个氨基酸.同源性分析表明,该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93.6%～99.8%,氨基酸同源性为88.6%～99.6%.系统发育进化树分析表明,新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致,与苏丹株和巴林株进化途径相差较远.氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇.  相似文献   

新疆牛环形泰勒虫Tamsl基因的克隆与序列分析   总被引：4，自引：2，他引：2  

黄家雨  马素贞  苗中秋  袁江玲  苏贵成  沈炯玉  张兰江  李晓军  简子健 《新疆农业大学学报》2008,31(4)

采用PCR技术，从新疆焦虫病疫区感染牛的全血中扩增到Tamsl基因，该基因长度为846bp，编码281个氨基酸。同源性分析表明，该基因与其他9个国际流行虫株的核苷酸同源性为93．6％～99．8％，氨基酸同源性为88．6％～99．6％。系统发育进化树分析表明，新疆分离株同印度株、毛利塔尼亚株、土耳其株、北非共和国株进化途径一致，与苏丹株和巴林株进化途径相差较远。氨基酸抗原决定簇分析发现新疆分离株编码的氨基酸有13个抗原决定簇。  相似文献   

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究     

李海龙  邓双义  袁江玲  陈静波 《动物医学进展》2006,27(11):92-95

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。  相似文献   

新疆牛环形泰勒虫Tams1基因的克隆与表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

简子健  黄家雨  马素贞  袁江玲  苏贵成  苗中秋  沈炯玉  张兰江  李晓军 《中国预防兽医学报》2008,30(10)

采用PCR方法扩增环形泰勒虫Tams1基因,将扩增产物与pUcm-T载体连接,重组质粒经PCR和双酶切鉴定、测序确认后被亚克隆于pGEX-4T-2表达载体中.构建的表达重组质粒经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western blot分析.结果显示,克隆的Tams1基因片段长846 bp,为一个完整的开放阅读框,编码281个氨基酸,与GenBank中的Tams1基因核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;系统进化树分析表明新疆分离株与印度株、毛利塔尼亚株和北非共和国株进化途径一致,与苏丹株、巴林株进化途径相差较远;推测的蛋白质抗原决定簇预测表明,Tams1基因编码的氨基酸具有13个交叉的抗原决定簇;表达的融合蛋白为56 ku,能够被环形泰勒虫多克隆血清所识别,表明该融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,为进一步开展牛环形泰勒虫的分子生物学诊断、亚单位疫苗和核酸疫苗的研究奠定了可靠的基础.  相似文献   

PRRSV新疆分离株的ORF5序列分析与同源性比较     

苏贵成  盛卓君  马素贞  胡峻  王薇  袁江玲  黄家雨  简子健 《新疆农业大学学报》2008,31(6)

采用RT-PCR技术,分别对PRRSV新疆分离株XJ-a,XJ-b,XJ-c的ORF5片段的ORF5基因进行扩增,获得长度为603 bp的特异性目片段.ORF5片段序列分析表明,新疆3个分离株的ORF5基因与欧洲型PRRSV毒株序列核苷酸的同源性为56.1%～56.4%,与标准美洲型PRRSV毒株序列的核苷酸同源性达到86.6%～87.2%,与国内部分省市流行株的同源性在96.0%～99.2%.PRRSV新疆分离株属于北美洲型PRRSV的变异毒株,属同一亚型,毒株间也存在一定的差异,具有高度致病性的生物学特征.  相似文献   

哺乳动物胚胎低温保存研究进展     

邓双义  李海龙  袁江玲 《中国牛业科学》2006,32(6):60-63

胚胎冷冻是一项新的细胞冷冻保存技术,胚胎低温保存对于提高哺乳动物繁殖效率有很重要的意义,本文对家畜胚胎低温保存的特点,原理和方法进行了综述,并介绍了下班化冷冻保存的新方法。  相似文献   

牛梨形虫病综合防治措施的实验性研究     

桑彩霞  马素贞  简子健  袁江玲  吕伟  陶玉成 《新疆农业科学》2012,49(1):161-164

[目的]处于干旱、半干旱区的新疆是蜱侵袭较严重的地区.目前已发现牛群中存在这三种梨形虫病,但只有牛泰勒虫病有有效的疫苗防治.探讨新疆牛梨形虫病综合防治措施,制定出该区综合性的预防和治疗方案并予以实施.[方法]选择牛梨形虫病比较严重的疫区作为实验点,根据该区的气候、季节特点,通过流行病学调查、驱蜱、疫苗接种、药物治疗.[结果]该区的牛梨形虫病综合防治措施牛梨形虫病的发病率显著降低,实验期间牛群中没有发现死亡.[结论]通过制定牛梨形虫病综合防治措施使疫区牛群的牛梨形虫得到有效控制,在新疆农区与牧区具有借鉴意义.  相似文献   

牛巴贝斯虫新疆株MSA-2c基因重组质粒的构建、真核表达及其免疫反应性研究   总被引：7，自引：4，他引：3  

袁江玲  马素贞  沈炯玉  黄家雨  苏贵成  简子健  张兰江  李晓军 《新疆农业大学学报》2008,31(4)

根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1( ),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增可得到目的条带;用重组质粒pcDNA3.1( )-MSA-2c肌肉注射免疫小白鼠4次后,将获得的抗血清作为抗体,纯化的GST-MSA-2c融合蛋白作为抗原进行Western-blot检测,可得到抗原-抗体结合产生的特异性条带,表明重组质粒具有免疫学活性.  相似文献