新城疫病毒TS09耐热株HN基因的序列测定与分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

商雨  邵华斌  王红琳  杨峻  胡薛英  程国富  温国元 《湖北农业科学》2011,50(12):2543-2547

新城疫病毒TS09耐热株是由V4株经耐热选育得到的新毒株.对其血凝素-神经氨酸酶(Hemagglutinin-Neuraminidase,HN)基因进行序列测定分析.选取GenBank中国内外具有代表性的序列与其进行同源性和系统进化分析.结果表明,氨基酸序列同源性比较中,TS09耐热株与V4株的氨基酸的同源性为96.8...  相似文献   

ClassⅠ新城疫病毒单克隆抗体的制备     

《山东农业科学》2019,(10):135-138

本试验以纯化的新城疫病毒(NDV)弱毒株D58为免疫原免疫6～8周龄BALB/c小鼠,分离脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,经多次ELISA鉴定和血凝抑制试验(HI)筛选和亚克隆培养,获得了4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞并制备了单抗。经鉴定,4株单抗均有ELISA效价,其中1株单抗有中和活性和HI活性,只与ClassⅠNDV反应,与ClassⅡNDV不反应。该单抗与不同群NDV反应的差异性为NDV的鉴别诊断和不同毒株抗原差异性研究奠定了一定基础。  相似文献   

新城疫不同宿主源分离株的生物学特性     

潘群兴  王永山  杨建朋  王晓丽  诸玉梅  欧阳伟  李银  何孔旺 《江苏农业学报》2011,27(6)

选择6株(鹅DC01、鸡WJ10001、鸽DZ01、鸽DZ02、鸭NJ10、鸭SD09)分离自鸡、番鸭、鹅、鸽的新城疫病毒,接种于10日龄无特定病原体(SPF)鸡胚中,通过测定鸡胚平均死亡时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)及融合蛋白(F)裂解位点氨基酸序列,研究其生物学特性和分子流行病学特征.结果显示,6个分离毒株均为新城疫病毒(NDV)强毒株.对F基因的序列测定和遗传关系分析表明,2株鸭源NDV强毒株(鸭NJ10、鸭SD09)与1株鸭源NDV山东流行毒株(鸭SDWF2005)高度同源;2株鸽源NDV强毒株(鸽DZ01、鸽DZ02)与1株鸽源DNA强毒株(鸽JS2000)高度同源.6株不同宿主源毒株的基因型分别为Ⅵ型和Ⅶ型,是中国目前流行的NDV毒株型.  相似文献   

新城疫病毒HN09-69株P基因的克隆、序列分析及表达     

陈礼朋  王忠田  岳旭龙 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2012,40(2):20-26

【目的】对新城疫病毒(NDV)HN09-69株P基因进行克隆、序列分析和表达鉴定,为研究P和V蛋白的功能,及NDV新流行毒株的免疫预防提供理论依据。【方法】以HN09-69株NDV为研究对象,根据GenBank上发布的相关P基因参考序列设计引物,进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析,将P基因的核苷酸序列与相关参考株的P基因序列进行比对分析并构建进化树。将P基因克隆到原核表达载体PET28a(+)中,得到重组质粒rPET28a(+)-P,将重组表达质粒转化到BL21（DE3）中诱导表达,用SDS-PAGE电泳和Western blotting检测表达情况。【结果】扩增出了HN09-69株P基因的ORF,序列长度为1 188 bp。NDV HN09-69株核苷酸与弱毒株La Sota、clone-30同源性分别为82.5%和82.4%,与强毒株F48E8同源性为84.9%,与鸭源,鹅源NDV核苷酸同源性分别为97.9%～98.4%和96.0%～98.0%。SDS-PAGE电泳和Western blotting检测结果表明,重组P蛋白分子质量约为54 ku,符合预期结果,在大肠杆菌中主要以可溶性的形式表达。【结论】NDV HN09-69株与SDWF-02和SD-09鸭源强毒分离株同源性高,亲缘关系近。重组P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。  相似文献   

表面活性素体外抗新城疫病毒活性研究     

黄现青  魏战勇  高晓平  韩庆功  崔艳红 《浙江农业科学》2008,1(5):0-632

研究了表面活性素(Surfactin)的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) lasota株效果.观察表面活性素的细胞毒性、对NDV直接灭活作用、抗NDV吸附作用及对NDV生物合成抑制作用.结果表明生物表面活性素对鸡胚成纤维(Chicken Embryo Fibroblasts,CEV)细胞的TD50和TD0分别为62.5、16.125μg/ml;具有直接灭活NDV及抗其吸附效果,可剂量依赖性抑制NDV生物合成.  相似文献   

鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李青梅  王丽  冯丽丽  张雨杭  赵东  杨艳艳  邢广旭  柴书军  李赛赛  张丽萍  郭军庆  张改平 《河南农业科学》2017,46(1)

采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。  相似文献   

新城疫病毒的抗独特型单克隆抗体的研制——新城疫单克隆抗独特型疫苗研究(Ⅱ)     

董国雄  秦爱建  李俊宝 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1992,(1)

作者用纯化 FE_8和 LA_(15-6)2株抗新城疫病毒(NDV)中和性单抗(MAb_1)分别免疫 BALB/c /小鼠,经杂交瘤技术获得2株抗独特型单克隆抗体(MAb_2),分别命名为AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id.在血凝抑制阻断试验(BHI)中,2株MAb_2都能阻断FE_8MAb_1抑制NDV血凝活性,BHI效价分别达1:8和1:4.在中和抑制试验(NIT)中,2株MAb_2在 1:10～1:80稀释时均可特异地抑制FE_8MAb_1中和NDV的能力,使部分试验鸡胚死于NDV感染.这些结果不仅表明,2株MAb_2的抗原结合位点是针对FE_8MAb_1独特型决定簇的,而且提示它们的可变区构形和与FE_8MAb_1相结合的NDV抗原决定簇或其邻近结构相似.这2株MAb_2可用于新城疫单克隆抗独特型疫苗的研究。  相似文献   

新城疫活疫苗HB92克隆株的筛选、纯化与细胞培养特性观察     

杨峻  邵华斌  温国元  王红琳  艾地云  罗青平  张蓉蓉  罗玲  廖永洪 《湖北农业科学》2009,48(6)

将引进的新城疫V4无毒耐热毒株连续用鸡胚传代.每次挑选48～96 h有明显病变的死亡鸡胚,取其尿囊液毒于-20℃保存,观察V4毒株对鸡胚毒力的病理变化.结果显示,经过20代次的鸡胚毒力筛选.V4毒株对鸡胚的致死率从小于10%上升至20%以上,接种后120 h的活胚有明显地萎缩症状.将鸡胚20代次以上筛选的V4病毒液在鸡胚成纤维细胞上传代培养,并进行蚀斑筛选纯化病毒,直到第5代才出现明显地细胞病变.使用二层琼脂进行病毒的蚀斑分析,第二层琼脂糖在第一层凝固后72 h覆盖,8 h后NDV鸡胚成纤维细胞适应株的蚀斑出现.蚀斑大小直径在1～2 mm变化.通过对NDV V4鸡胚毒力筛选和蚀斑纯化.获得了一株蚀斑克隆株(NDV HB92).  相似文献   

鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

钱凤芹  刘长梅  任红梅  李爱芹  庄文忠 《山东农业科学》2001,(3):29-31

鸡新城疫病毒 (NDV)山东分离株在鸡胚增殖后纯化 ,利用特异性引物 ,经RT -PCR技术扩增出了F基因重要功能片段 ,将该基因克隆入pGEM -T载体后 ,对其进行酶切分析和序列测定 ,结果表明 ,山东分离株为强毒株。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比较 ,经遗传基因进化树分析 ,证实NDV山东分离株属于基因型Ⅶ型  相似文献   

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

李小丽  彭惠惠  唐欣昀 《安徽农业大学学报》2009,36(4)

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).  相似文献