江苏地区奶牛场blaNDM阳性大肠杆菌的分子流行病学     

王警  张雪寒  郭芸芸  张碧成  吴庆侠  何孔旺 《江苏农业学报》2020,36(2):391-397

为了调查江苏地区奶牛场大肠杆菌中bla_(NDM)基因的分子流行病学特征。从江苏部分地区3个奶牛场采集样品134份,使用PCR和测序的方法筛选bla_(NDM)阳性大肠杆菌,同时对其进行超广谱β-内酰胺酶类基因的检测,采用药敏试验检测bla_(NDM)阳性大肠杆菌对19种常用抗生素的敏感性,通过多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对携带NDM基因的大肠杆菌进行亲缘关系分析,通过质粒结合试验验证bla_(NDM)基因的可转移性。结果显示,从134份奶牛场样品中共分离15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌,包括NDM-1和NDM-5 2种变体。15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌对多种抗生素均呈现不同程度的耐药,奶牛场15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌包括7种ST型,分别是ST410、ST846、ST206、ST101、ST1642、ST3076、ST1626,同一种ST型在粪便样品和环境样品中同时存在,表明相同ST型bla_(NDM)阳性大肠杆菌可在动物与环境间相互传播。PFGE试验结果表明,15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌可以分为11个簇,同一样品的分离株倾向于相同的簇,在比较小的范围内存在PFGE图谱相同的现象;对15株菌株的结合子进行bla_(NDM)基因的转移性试验结果表明,15株大肠杆菌的bla_(NDM)耐药基因均通过质粒结合转移至受体菌J53。表明,bla_(NDM)阳性大肠杆菌在江苏省部分地区奶牛场中流行相对较为严重,存在多重耐药现象,推测bla_(NDM)基因主要通过质粒结合转移的方式进行水平传播,这为食品源耐药菌的监测及风险评估提供了依据。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的制备及攻毒保护研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐宏军  杨鹏程  任丽  胡来根  何孔旺  刘文倩  代洪波 《动物医学进展》2015,(1):35-39

为研究现用猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株对流行毒株的免疫保护效果,以RTPCR进行PEDV CV777疫苗株、JS12流行株S基因克隆测序,进行PEDV S基因核酸序列分析与氨基酸序列分析。分别以转瓶工艺与细胞悬浮培养工艺培养Vero E6细胞,制备PEDV CV777株转瓶灭活苗与悬浮灭活苗。分别以PEDV转瓶灭活苗、悬浮灭活苗、PEDV流行株组织灭活苗(JS12株)产前30d免疫经产母猪;母猪产仔后14d进行仔猪攻毒保护试验。核酸序列分析显示,PEDV CV777株S基因与流行毒株的相似性在96.4%~99.7%之间,氨基酸序列相似性在96.7%~99.5%之间。转瓶工艺制备PEDV抗原效价为107.0 TCID50/mL,悬浮培养制备PEDV抗原效价为108.5 TCID50/mL。攻毒保护试验显示,悬浮灭活苗免疫母猪后,仔猪有2/10发病,保护率为8/10,转瓶灭活苗组发病率为8/10,保护率仅为2/10;组织灭活苗组9/10发病;对照组10头全部发病。该试验证明,提高PEDV CV777株的抗原含量,能够有效提高疫苗对PEDV流行毒株的保护效果。  相似文献   

猪流行性腹泻病毒 TaqMan 荧光定量 PCR 方法的建立与应用简     

李 彬 刘浩飞 孙 冰茅爱华  杜露平何孔旺郭容利  温立斌张雪寒倪艳秀  周俊明吕立新俞正玉  王小敏胡屹屹  祝昊丹于 洋 《江苏农业学报》2014,(1):125-129

  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达     

王芳  何孔旺 《农业生物技术学报》2005,13(2):175-178

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniac)血清5型菌株序列ZA6774设计1对特异性引物，用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因，得到1条1624bp的片段，然后克隆到pMD18-T载体中，经测序比较，与参考序列的核苷酸同源性达99．8％，从T-载体中切下目的片段后，定向克隆到pET32a( )中，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)，经诱导后，SDS-PAGE电泳，Tbp2高效表达，Western-blotting鉴定呈阳性。  相似文献   

猪IL-1β与IL-18SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  吕立新  周俊明  张雪寒  李彬  汪伟  温立斌  王小敏  范红结  茅爱华  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1289-1294

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用.为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PC...  相似文献   

大肠杆菌热敏肠毒素B亚基的原核表达及生物学活性分析     

王会  何孔旺  陆承平 《中国兽医寄生虫病》2011,19(2):31-36

从大肠杆菌K88（LT＋,ST＋）菌株中扩增热敏肠毒素B亚基基因（ltb）,得到454 bp片段,克隆至pMD18-T载体后,与pET32a（＋）定向连接,并转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG 30℃诱导表达重组LTB蛋白。SDS-PAGE显示,重组蛋白分子量约为34 kDa,超声波裂解后,表达产物主要以包涵体形式存在。经鉴定,纯化复性后的LTB蛋白保留部分与GM1结合的生物学活性。  相似文献   

类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白二级结构与B细胞表位预测   总被引：2，自引：0，他引：2  

温立斌  何孔旺  杨汉春  王玉然 《华北农学报》2009,24(5)

旨为预测类猪圆环病毒因子P1 VP2蛋白的B细胞表位.采用生物信息软件和互联网服务器,预测VP2的二级结构,分析VP2表面特性(亲水性、可塑性、可及性和抗原性),综合预测VP2的B细胞抗原表位.结果表明,P1 VP2蛋白肽链的6-18和80-92区段为预测的B细胞表位优势区.多参数方案综合预测P1 VP2蛋白的B细胞抗原表位,为进一步鉴定表位及设计疫苗奠定了基础.  相似文献   

牛轮状病毒性腹泻的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

何孔旺  林继煌 《中国兽医学报》1998,18(3):224-227

从安徽、河南两地黄牛犊腹泻粪样中分离出了３株能在ＭＡ－１０４细胞上稳定繁殖、继代的轮状病毒（标号为ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４及ＨＮ－７）。中和试验表明，该３株黄牛分离毒与北京奶牛毒ＢＲＶ６５５５及国外参考毒株ＮＣＤＶ之间抗原性无差异，同属轮状病毒血清６型（或牛轮状病毒血清１型），在亚组抗原特异性上均为第Ⅰ亚组。用ＢＲＶ０１４高代次（５０代以上）细胞培养物（ＴＣＩＤ５０＝１０－６．５）于孕母牛产前３个月和１个月经肌肉免疫注射２次，可明显提高母牛初乳中的轮状病毒抗体，在产后２０ｄ，抗体滴度仍能维持在１∶６４；临床观察，免疫母牛所产犊牛的腹泻发生率较对照组降低８３．８％。  相似文献   

南京部分牧场牛兔隐孢子虫感染研究初报     

何孔旺  戈建军 《江苏农业科学》1990,(6):54-55

用改良抗酸染色法检查南京地区部分奶牛场和兔场的牛、兔粪样。共发现3例隐孢子虫卵阳性牛,2例阳性兔。牛、兔群的隐孢子虫感染率分别为3.2％(3/94)和1.8％(2/113)。其中成年牛感染率为2.0％(1/50)、犊牛4.5％(2/44),而腹泻犊牛的感染率达16.7％(1/6)。同时在6例腹泻犊牛粪样中查出2例感染了轮状病毒。未发现隐孢子虫和轮状病毒混合感染病例。  相似文献   

优化致仔猪水肿病大肠杆菌培养物方法的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

吕立新  何孔旺  还红华  邵国青  倪艳秀  王继春  刘冬霞 《江苏农业科学》2003,(1):53-55

为摸索提高致仔猪水肿病大肠杆菌培养菌数的简单易行的方法，以普通肉汤和马丁汤为基础培养液，分别调整培养成分、通气培养和人工调节培养液的pH值，结果表明：通气培养和维持适宜的pH值能大幅度提高菌数，且马丁汤培养液明显优于普通肉汤培养液。  相似文献