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1.
间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件 总被引：26，自引：0，他引：26
禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板,将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ,确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ４℃冰箱 相似文献
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间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件 总被引：2，自引：0，他引：2
禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。 相似文献
3.
应用牛腹腔唇乳突丝虫提纯抗原（简称牛丝虫Ｇ抗原）和抗人ＩｇＧ酶标记物的酶联免疫吸附试验，检测２２７例班氏丝虫病人血清的阳性率为９５．５９％；检测１３２例健康人血清的假阳性率为２．２７％，１０例血吸虫病人血清的阳性率为０。应用牛丝虫Ｇ抗原和马来丝虫抗原同步检测５０例班氏丝虫病人血清的阳性睾，前者为９８％，后者为８６％，二者有显著差异（Ｐ〈０．０５）。因此认为，牛丝虫Ｇ抗原可以作为人丝虫病人的异种抗原 相似文献
4.
应用牛腹腔唇乳突丝虫（Ｓｅｔａｒｉａｌａｂｉａｔｏｐａｐｉｌｌｏｓａ）提纯抗原（简称牛丝虫Ｇ抗原）和抗人ＩｇＧ酶标记物的酶联免疫吸附试验，检测２２７例班氏丝虫病人血清的阳性率为９５．５９％；检测１３２例健康人血清的假阳性率为２．２７％，１０例血吸虫病人血清的阳性率为０。应用牛丝虫Ｇ抗原和马来丝虫抗原同步检测５０例班氏丝虫病人血清的阳性率，前者为９８％，后者为８６％，二者有显著差异（ｐ＜０．０５）。因此认为，牛丝虫Ｇ抗原可以作为人丝虫病的异种抗原诊断试剂。 相似文献
5.
分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定 总被引：7，自引：0，他引：7
从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链 相似文献
6.
以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾ 相似文献
7.
用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与 相似文献
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酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究 总被引：7，自引：1，他引：6
建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳 相似文献
9.
七、酶与蛋白质结合选用酶和蛋白质结合首先要注意标记的分子情况,酶一抗原或酶一抗体结合物往往利用戊二醛法或过碘酸钠法进行制备。酶一半抗原结合物大多数 相似文献
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Dot—ELISA间接法检测鸡新城疫病毒（NDV）的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１：１０００;选用硝酸纤维素（ＮＣ）膜作固相载体,建立检测ＮＤＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＮＤＶ鸡胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染非免疫鸡的气管组织、肺组织各４７份,检出率为９３．６％;人工感染ＳＰＦ鸡气管组织、肺组织各４０份,检出率１００％。与传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）无交叉反应。试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观,便于生产应用 相似文献
11.
Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究 总被引：10，自引：3，他引：7
用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测 相似文献
12.
有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用 总被引：2，自引：1，他引：1
应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有 相似文献
13.
银加强胶体金探针检测鸡减蛋综合征病毒的研究 总被引：4，自引：1，他引：3
本研究首镒报道应用银加强胶体金探针检测减蛋综合征病毒获得成功。经初步提纯后的ＥＤＳ７６病毒免疫制备高免血清，按常规方法提取兔抗ＥＤＳ７６病毒的ＩｇＧ，成功地建立了检测ＥＤＳ７６病毒抗原的银加强胶体金探针法，并确定了操作程序的最佳试验条件为；兔抗ＥＤＳＶＩｇＧ工作浓度为１：４００，金标记羊抗兔ＩｇＧ的工作浓度为１：２０，银染色的时间为１５ｍｉｎ。用该法对提纯的ＥＤＳ７６病毒抗原的最低检出一为０．１１ 相似文献
14.
以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体（ＩＢＤ—ＩｇＧ），饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１：５０；酶标抗体的工作浓度为１：１００；洗涤液为含０．０５％吐温—８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％明胶的洗涤液；封闭时间、抗原及酶标抗体的作用时间均为３７℃３０ｍｉｎ。应用本方法和琼扩试验同步检测２０份已知阳性病料、１２０份待检病料和胚毒尿囊液、１０份正常鸡样品，结果表明，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性率为９０％，而琼扩试验为４０％；凡琼扩试验阳性者，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ均呈强阳性，而在Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性样品中，只有４４％呈琼扩试验阳性，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ的敏感度为琼扩试验的１００倍。 相似文献
15.
将纯化的溶血性巴氏杆菌生物Ａ型血清１型的荚膜多糖（ＣＰ）与盐溶液、氢氧化铝和福氏不完全油佐剂混合后，给３组犊牛注射不同的抗原制剂、５头成年母牛注ＣＰ盐制剂。接种后４周进行二次注射。将每周采集一次的血清样本以间接血凝试验检测溶血性巴氏杆菌特异性抗体；以ＥＬＩＳＡ检测ＣＰ特异性抗体。以纯化的ＣＰ刺激犊牛，能产生ＣＰ特异性ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２，成年母牛以产生ＩｇＭ和ＩｇＧ１占优势。第二次注射ＣＰ抗 相似文献
16.
雏鸡感染马立克氏病病毒合体液免疫球蛋白含量的变化 总被引：1，自引：1，他引：0
以马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染１日龄肉用雏鸡，在感染后５、２５、４５ｄ分别采取血清、泪液、胆汁、气管液和肠液，用间接酶联免疫吸附试验检测了这些体液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量的动态变化，结果如下：ＭＤＶ感染雏鸡血肖中ＩｇＧ，ＩｇＭ和ＩｇＡ含量较对照组显著降低，胆汁和肠液中的ＩｇＡ，ＩｇＧ和ＩｇＭ明显减少，泪液和气管液中的ＩｇＧ，ＩｇＭ和ＩｇＡ水平也显著下降。由此表明，ＭＤＶ感染不仅显著降低雏鸡全身 相似文献
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应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＥＬＩＳＡ测定了锌和其它微量元素对离体ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌免疫球蛋白（Ｉｇ）的影响。结果表明，０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ的锌能促进ｂｏＰＢＭＣ增殖（Ｐ〈０．０５）和分泌Ｉｇ（ＩｇＧ１，Ｐ〈０．０５：ＩｇＭ，Ｐ〈０．０１）；其它微量元素，诸如镍，铜，铁，镉等均无这种作用。此外锌对培养２ｄ后的细胞不表现出促进作用的结果表明，锌主要作用于免疫细胞被活化的初始阶段，提高了细胞的增殖和分 相似文献
18.
以马立克氏病病毒（ＭＤＶ）感染１日龄肉用雏鸡，在感染后５、２５、４５ｄ分别采取血清、泪液、胆汁、气管液和肠液，用间接酶联免疫吸附试验检测了这些体液中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量的动态变化。结果如下：ＭＤＶ感染雏鸡血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ含量较对照组显著降低，胆汁和肠液中的ＩｇＡ、ＩｇＧ和ＩｇＭ明显减少，泪液和气管液中的ＩｇＧ、ＩｇＭ和ＩｇＡ水平也显著下降。由此表明，ＭＤＶ感染不仅显著降低雏鸡全身体液免疫水平，而且也严重抑制消化道和呼吸道局部体液免疫机能。 相似文献
19.
猪某些免疫指标及其与部分生产性状关系的研究 总被引：5，自引：1，他引：4
实验测定了哈白、杜洛克猪３月龄和５月龄的总数Ｅ－玫瑰花环形成细胞百分率、活性Ｅ－玫瑰花环形成细胞百分率、淋巴细胞转化率、血清ＩｇＧ含量及５月龄接种布氏杆菌猪型二号苗后７、２１、３５６的特异性抗体滴度，对这些免疫指标及其与部分生产性状的关系进行了分析，旨在为猪的抗病育种提供依据。实验结果表明：（１）３月龄和５月龄几个免疫指标均存在品种差异，哈白猪显著地高干杜洛克猪；（２）３月龄与５月龄间所测细胞免疫指标无显著差异，但５月龄血清ＩｇＧ含量显著高于３月龄血清ＩｇＧ含量；（３）哈白与杜洛克猪对布氏杆菌疫苗的抗体应答能力存在显著差异；（４）所测定的细胞免疫指标间大多表现正的相关，体液免疫指标间亦表现正的相关，而细胞免疫指标和体液免疫指标间大多具有较弱的相关；（５）所测定的几个免疫指标与生产性状间大多具有较弱的相关。 相似文献
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用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记经兔体高免提纯的兔抗羊传染性脓疱病（Ｏｒｆ）ＩｇＧ，用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测不同毒株的传染性脓疱病毒及病毒基因在载体中重组克隆后转化到受体菌中的表达情况。结果表明，ＨＲＰ标记的ＩｇＧ，经自动酶标光度计检测，对ＨＣＥ、ＨＬＲ、ＬＭＥ、ＤＰＥ、ＨＢＧＥ、ＹＬＧＥ毒、ＬＴＥ囊膜蛋白及ＨＣＥ１０代细胞毒都呈现特异性反应。在模式２的检测中，ＯＤ值均在０．０７以上，在模式３的检测中，都呈现阳性。受检的４株重组转化大肠杆菌中，一株表现阳性，说明重组菌对Ｏｒｆ病毒的抗原产生表达。试验证明，ＥＬＩＳＡ是对羊传染性脓疱病毒进行诊断检测的一种快速、灵敏、准确的方法。 相似文献